RIZ1真核表達質粒對人食管癌TE13細胞裸鼠移植瘤的生長抑制.pdf

1、[目的]
　　建立人食管癌TE13細胞裸鼠移植瘤動物模型，將RIZ1真核表達質粒轉染人食管癌TE13細胞裸鼠移植瘤，探討RIZ1真核表達質粒對人食管癌TE13細胞裸鼠移植瘤的抑制作用
　　[方法]
　　1、細胞培養(yǎng)
　　常規(guī)方法復蘇人食管癌TE13細胞株，在含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中常規(guī)傳代。細胞培養(yǎng)時問及數(shù)量達到實驗要求時，進行細胞收取及細胞計數(shù)。
　　2、建立人食管癌TE13細胞裸鼠移植瘤模型及

2、實驗分組干預
　　BALB/c裸鼠在SPF級動物飼養(yǎng)室飼養(yǎng)觀察三天后，裸鼠一般狀況良好，于第四日將收集好處于對數(shù)生長期的人食管癌TE13細胞由同一人于裸鼠同一部位（右側腋窩）進行接種。接種后觀察裸鼠一般狀況及腫瘤生長情況。
　　當裸鼠腫瘤平均直徑約為0.5cm時（注射細胞懸液后第15天），舍去移植瘤體積最大和最小的兩只裸鼠，將剩余裸鼠用隨機數(shù)字法分成3組，每組5只。具體分組如下:①空白對照組:給予生理鹽水100μl/次;②空

3、質粒組:脂質體20μl+空質粒20μg，用DMEM培養(yǎng)基調整液體總量至100μl/次;③pcDNA3.1(+)/RIZ1實驗組;脂質體20μl+RIZ1真核表達質粒20μg，用DMEM培養(yǎng)基調整液體總量至100μl/次。三組均采用瘤內多點注射，隔兩天1次，共5次。
　　3、應用RT-PCR、Western blot技術檢測RIZ1 mRNA及其蛋白的表達
　　處死裸鼠后，提取裸鼠移植瘤組織中的RNA，逆轉錄合成cDNA。應用

4、RIZ1引物進行半定量PCR反應以擴增出基因組的RIZ1以及GAPDH，擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳。提取裸鼠腫瘤組織中蛋白，利用Western blot技術對提取的樣品電泳、轉膜、封閉、免疫反應后，用化學發(fā)光試劑盒顯色、照相。
　　4、人食管癌TE13細胞裸鼠移植瘤形態(tài)學觀察
　　觀察裸鼠一股狀況及移植瘤生長變化;測量腫瘤的長、短徑，計算腫瘤體積;處死裸鼠后，剝離腫瘤、稱取瘤重，將瘤體組織進行HE染色。
　　[結果]<

5、br>　　1、成功構建人食管痛TE13細胞裸鼠移植瘤模型
　　接種細胞一周后觀察有所有裸鼠均有瘤體生成，且生長速度較快，15天后觀察裸鼠腫瘤平均直徑可達0.5cm，測量瘤體平均體積在100mm3左右，腫瘤移植成功率達100％。瘤體組織HE染色結果顯示其具有腫瘤細胞的特征。
　　2、RIZ1基因在人食管癌TE13細胞裸鼠移植瘤中的表達
　　移植瘤中提取的RNA經RT-PCR后，產物電泳結果顯示:pcDNA3.1(+)/R

6、IZ1實驗組在100bp～200bp之間出現(xiàn)清晰條帶，其大小與理論預期值(167bp)一致。應用Western blot檢測各組內RIZ1蛋白的差異，結果顯示:pcDNA3.1(+)/RIZ1實驗組可見明顯RIZ1蛋白表達，而空白對照組與空質粒組RIZ1蛋白成低表達。統(tǒng)計學分析表明，pcDNA3.1(+)/RIZ1實驗組RIZ1 mRNA及RIZ1蛋白的相對表達量明顯高于空白對照組及空質粒組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);空白對照

7、組與空質粒組RIZ1 mRNA及RIZ1蛋白的相對表達量比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　3、RIZ1真核表達質粒對人食管癌TE13細胞裸鼠移植瘤生長的抑制作用
　　最后一次注射RIZ1真核表達質粒后第7天處置各組裸鼠，空白對照組、空質粒組、pcDNA3.1(+)/RIZ1實驗組瘤體平均體積(cm3)分別為:(2.208±0.085)，(2.098±0.089)，(1.025±0.018)。瘤體平均重量(g)為:（

8、2.334±0.101），（2.188±0.082），（1.041±0.063）。pcDNA3.1(+)/RIZ1實驗組腫瘤體積及重量明顯小于空白對照組及空質粒組，差異具有統(tǒng)計學顯著意義(P＜0.05);空白對照組與空質粒組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。抑瘤率為53.6％。
　　[結論]
　　1.應用人食管癌TE13細胞可以建立人食管癌裸鼠移植瘤模型
　　2.對人食管癌TE13細胞裸鼠移植瘤進行脂質體介導pcD