AGEs通過CaMKIV、p38MAPK、NF-κB途徑促進Jurkat細胞分泌IFN-γ.pdf

1、目的:晚期糖化終產物(AGEs)通過與特異性受體晚期糖化終產物受體(RAGE)結合,損傷血管內皮細胞、促進白細胞黏附、刺激血管平滑肌細胞增殖、促進炎癥因子的表達等而加速動脈粥樣硬化的發(fā)生。本課題組前期研究發(fā)現AGEs通過RAGE,p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK),核因子-κB(NF-κB)途徑,促進Jurkat細胞分泌腫瘤壞死因а(TNF-а)、干擾素-γ(IFN-γ),并引起鈣調蛋白依賴性蛋白激酶IV(CaMKIV)表達增加

2、,因此本研究將進一步觀察CaMKIV在AGEs誘導Jurkat細胞分泌IFN-γ中的作用,探討RAGE胞內信號通路中起關鍵作用的信號分子。
　　方法:①常規(guī)方法制備AGEs。200μg/ml的AGEs作用于植物血球凝集素(PHA)(0.25μg/ml)預刺激48h后的jurkat細胞0、30、60min后,蛋白免疫印跡法(Western blot)分別檢測胞漿及胞核CaMKIV的表達,計算CaMKIV的核漿比值,同時設RAGE抗體

3、(1μg/ml)干預組、非特異性抗體IgG(1μg/ml)及牛血清白蛋白(BSA)(200μg/ml)對照組。②200μg/ml的AGEs作用于CaMKIV抑制劑(KN62)(10μM)預處理的Jurkat細胞24h,ELISA檢測IFN-γ表達。③200μg/ml的AGEs作用于KN62(10μM)預處理的Jurkat細胞30min,Western blot檢測檢測IκB磷酸化表達水平。④200μg/ml的AGEs作用于KN62(10

4、μM)預處理的Jurkat細胞30min,Western blot檢測檢測p38MAPK磷酸化水平的影響。
　　結果:①200μg/ml的AGEs作用于PHA預刺激的jurkat細胞30、60min后,Westernblot結果顯示CaMKIV的核漿比值增大,提示AGEs能引起CaMKIV發(fā)生核轉位,與BSA組及PHA對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);RAGE抗體能抑制AGEs誘導的CaMKIV核轉位(P<0.05),

5、而非特異性抗體IgG不能抑制AGEs誘導的CaMKIV核轉位。②200μg/ml的AGEs作用于PHA預處理的Jurkat細胞24h后,IFN-γ的表達較BSA組及PHA組明顯增多(P<0.01),KN62能抑制AGEs誘導的IFN-γ的表達(P<0.05)。③200μg/ml的AGEs作用于PHA預處理的Jurkat細胞30min后,p-IκB表達較BSA組及PHA組明顯增多(P<0.01),KN62能抑制AGEs上調p-IκB(P<

6、0.05)。④200μg/ml的AGEs作用于PHA預處理的Jurkat細胞30min后,p-p38MAPK表達較BSA組及PHA組明顯增多(P<0.01),KN62能抑制AGEs誘導的p-p38MAPK的表達(P<0.01)。
　　結論:AGEs可通過RAGE誘導Jurkat細胞CaMKIV的活化,并且通過RAGE-CaMKIV引起NF-κB的激活及炎癥因子IFN-γ的分泌,進一步研究證實CaMKIV與p38MAPK通路存在串話