兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過抑制NF-κB途徑延緩髓核細(xì)胞退變.pdf

1、目的：探討兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrow-derivedmesenchymalstemcells，BMSCs)延緩髓核細(xì)胞(nucleuspulposuscells，NPCs)退變的機(jī)制。
　　 方法：取1月齡新西蘭大白兔的髓核及雙側(cè)股骨和脛骨處骨髓進(jìn)行NPCs及BMSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定，實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)培養(yǎng)組：單純NPCs培養(yǎng)組，單純BMSCs培養(yǎng)組，NPCs及BMSCs(1:1)共培養(yǎng)組。在培養(yǎng)的第3d、5d、7d

2、、9d用CCK8法測定三組細(xì)胞增殖情況。在培養(yǎng)的不同時(shí)間點(diǎn)(5d，8d，11d，14d)RT-PCR(reversetranscriptase-polymerasechainreaction)檢測三組蛋白聚糖、Ⅱ型膠原、SOX-9的mRNA的表達(dá)變化；ELISA法檢測三組TGF-β1的含量變化；Western-blot法檢測三組NF-κB的含量變化；并以免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定三組細(xì)胞各時(shí)間點(diǎn)Ⅱ型膠原的表達(dá)。
　　 結(jié)果：成功分離培

3、養(yǎng)兔BMSCs及NPCs，BMSCs鑒定呈CD29+、CD90+、CD34-。第3d起共培養(yǎng)組細(xì)胞增殖能力高于其他兩組，且隨培養(yǎng)時(shí)間的延長而增加。笫11d起共培養(yǎng)組中SOX-9表達(dá)高于其余兩組；第14d起共培養(yǎng)組中的蛋白聚糖及Ⅱ型膠原的表達(dá)高于其余兩組。第11d起共培養(yǎng)組TGF-β1含量較其余兩組增高，而NF-kB的含量較另外兩組降低。結(jié)論：BMSCs與NPCs共培養(yǎng)后能促進(jìn)NPCs蛋白聚糖、Ⅱ型膠原、SOX-9的表達(dá)，延緩NPCs的退