圍產(chǎn)蒙古牛外周PMNs的GC受體信號表達(dá)及作用研究.pdf

1、試驗(yàn)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot方法檢測GC特異性受體、孕酮核受體與膜受體及TLR2、TLR4和NFκB的表達(dá)，從基因和蛋白水平上探討GC介導(dǎo)外周PMN抑制的受體途徑與細(xì)胞效應(yīng)，為闡釋GC在圍產(chǎn)蒙古牛免疫抑制中的作用提供新的理論證據(jù)。
　　1.圍產(chǎn)牛:選圍產(chǎn)蒙古牛3頭，于-14d，-10d，-7d，-3d，-1d，0d，1d，3 d，7d，10d，14d頸靜脈采血分離PMN。mRNA豐度分析表明，GRα、GRβ

2、、PR、PRB、mPRα、mPRβ在-14d～0d呈下降趨勢，0d后呈時(shí)間依賴性上調(diào)(P＜0.05);PGRMC1表達(dá)與圍產(chǎn)期GC水平呈負(fù)相關(guān);MyD88在臨近分娩時(shí)迅速上調(diào)(P＜0.05)后下降，但維持在高于產(chǎn)前水平(P＜0.05);TLR2、TLR4均于產(chǎn)前平緩下降、產(chǎn)后升高;NFκB在臨近分娩階段呈上升趨勢，并維持穩(wěn)定表達(dá)。
　　2.閹牛體內(nèi)注射:分別于注射DEX后0.25h、0.5h、1h、4h和8h采血分離PMN。mRN

3、A豐度分析表明:GRα、mPRβ呈時(shí)間依賴性下調(diào)(P＜0.05);mPRα、MyD88短時(shí)下調(diào)(P＜0.05)，而后維持穩(wěn)定低表達(dá);GRβ、PRB、NFκB短時(shí)升高(P＜0.05)后降至注射前水平穩(wěn)定表達(dá);PR、TLR2迅速降至低水平并穩(wěn)定表達(dá)(P＜0.05);PGRMC1下調(diào)(P＜0.05);短時(shí)刺激即上調(diào)TLR4(P＜0.05)并維持高表達(dá)。
　　3.體外誘導(dǎo):選取4ng/mL、16ng/mLDEX，分別建立DEX、DEX+L

4、PS、DEX+RU486+LPS的PMN培養(yǎng)體系，于培養(yǎng)0.25h、0.5h、1h、4h和8h檢測基因和蛋白。mRNA豐度分析表明:4ng/mL DEX誘導(dǎo)GRα、GRβ、PR、PRB、mPRα、mPRβ、MyD88、TLR2和TLR4的基因表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)，NFκB短時(shí)上調(diào)(P＜0.05)后抑制(P＜0.05);16ng/mLDEX抑制GRα、GRβ、PR、PRB、mPRβ表達(dá)(P＜0.05)，上調(diào)NFκB和TLR4(P＜0.

5、05)，而MyD88、mPRα和TLR2表達(dá)不變(P＞0.05);4ng/mL、16ng/mL DEX與LPS共培養(yǎng)后，GRα、GRβ、PR、PRB、mPRα、mPRβ、TLR2、MyD88和NFκB表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)，4ng/mLDEX+LPS上調(diào)TLR4表達(dá)(P＜0.05)，16ng/mLDEX+ LPS其表達(dá)不變(P＜0.05);4ng/mL DEX+LPS+RU486共培養(yǎng)上調(diào)GRα、GRβ、PR、PRB、 mPRα、mP

6、Rβ、TLR2、TLR4表達(dá)(P＜0.05)，抑制MyD88表達(dá)(P＜0.05)，NFκB表達(dá)不變;16ng/mL DEX+LPS+RU486抑制PR、mPRα、mPRβ表達(dá)(P＜0.05)，上調(diào)GRβ、PRB、TLR2、TLR4、MyD88、NFκB(P＜0.05)，GRα無明顯變化;而所有處理組的PGRMC1均下調(diào)(P＜0.05)。
　　4.Western Blot檢測顯示，PMN表達(dá)GR、PR、mPRβ、PGRMC1、TLR