梅魚酶解多肽的分析及功能性研究.pdf

1、梅魚作為海洋低值魚類,是我省海洋捕撈的主要對(duì)象之一。梅魚中蛋白含量高,目前這一蛋白資源尚未得到高值化或工業(yè)化利用。利用梅魚蛋白酶解制備活性多肽,可充分利用這部分蛋白資源,提高其產(chǎn)品價(jià)值。 本課題主要以梅魚蛋白制備的多肽為原料,分析多肽的理化性質(zhì),利用電泳對(duì)酶解多肽的分子量和等電點(diǎn)進(jìn)行了測(cè)定。并通過多種分離手段對(duì)酶解多肽進(jìn)行了分離純化,對(duì)多肽的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制活性、抗氧化活性進(jìn)行了研究。 理化性質(zhì)的研究結(jié)果表明：多肽的

2、粗蛋白含量較高,粗脂肪含量相對(duì)偏低,僅為0.32％。梅魚多肽具有良好的溶解性和高濃度下的低粘度特性。氨基酸組成分析表明,梅魚多肽中的必需氨基酸含量豐富,總含量為47.41％。其中,賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸+胱氨酸及苯丙氨酸+酪氨酸的含量顯著高于FAO/WHO參考模式的建議值。 選用Sephadex G-10對(duì)多肽進(jìn)行脫鹽處理。之后分別采用SDS-PAGE、Tricine-SDS-PAGE以及等電聚焦電泳測(cè)

3、定了梅魚多肽的分子量和等電點(diǎn)。結(jié)果表明：較之SDS．PAGlE，Tricine-SDS-PAGE對(duì)小分子和復(fù)雜體系的分離效果較為理想；凝膠總濃度為16.5％、交聯(lián)度為5％的Tricine．SDS-PAGE系統(tǒng)分析酶解多肽的成分主要是分子量小于14.4 kDa的多肽；梅魚多肽主要由等電點(diǎn)小于7的酸性多肽組成。采用超濾、凝膠色譜、離子交換柱層析對(duì)梅魚多肽進(jìn)行分離，并在分離每步測(cè)定各組分的ACE抑制活性。梅魚多肽最初的ACE半抑制濃度為0．2

4、03mg/ml。多肽經(jīng)截留分子量為1000Da、5000Da、10000Da的膜超濾后，得到四個(gè)組分。其中組分I具有最大的ACE抑制活性，IC50為O.176mg/mI。組分I經(jīng)Sephadex G-25凝膠色譜分為Ia、Ib、Ic、Id四個(gè)組分。其中組分Ia無ACE抑制活性，組分IdACE抑制活性最高，IC50為O.088mg／ml。組分Id經(jīng)DEAE陰離子交換柱進(jìn)一步分為兩個(gè)組分，即Id(1)和Id(2)，其IC50分別為0.084