Sfi1p功能性多肽與Cdc31p作用的研究.pdf

1、大分子與大分子、大分子與小分子之間的相互作用是生命過程中生物信息調(diào)控的主要方式之一，當(dāng)它們發(fā)生異常作用時(shí)則會(huì)影響生命體正常的生長和繁殖。在生物體中，蛋白質(zhì)作為生命活動(dòng)的執(zhí)行者，是生物體中相當(dāng)重要的大分子。
　　 其中Sfilp是酵母細(xì)胞非常重要的蛋白，其與Cdc31p間的相互作用影響了釀酒酵母細(xì)胞的有絲分裂及減數(shù)分裂，是酵母細(xì)胞周期分裂過程中的一個(gè)關(guān)鍵蛋白。其內(nèi)部結(jié)構(gòu)由21個(gè)重復(fù)序列和20個(gè)間隔所組成，每一個(gè)重復(fù)序列的保守的氨基

2、酸序列為LLX3F/LX2W，由此序列可知，苯丙氨酸(F)是一個(gè)較為保守的氨基酸，其對(duì)于Sfi1p與Cdc31p以1∶1摩爾比相互作用具有重要作用，且間隔序列的“彈性繩模型”為二者作用提供有利空間條件。因此可以說重復(fù)序列和間隔是Sfi1p重要的功能性結(jié)構(gòu)。因此本論文通過對(duì)F分別突變?yōu)榘腚装彼?C)、蘇氨酸(T)、酪氨酸(Y)、異亮氨酸(I)不同的氨基酸發(fā)現(xiàn)，突變?yōu)榘腚装彼岷?，?7個(gè)重復(fù)序列多肽的末端構(gòu)象不同于突變?yōu)槠渌陌被針?gòu)象。究

3、其原因?yàn)楸奖彼釣榉枷阕灏被?，分子量?65.19，而其它的氨基酸為脂肪族氨基酸，分子量較小，空間結(jié)構(gòu)小,對(duì)多肽α螺旋結(jié)構(gòu)骨架有影響導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)的改變。
　　 隨后，采用PCR技術(shù)克隆將664位苯丙氨酸突變?yōu)榘腚装彼岬牡?7個(gè)重復(fù)序列基因序列，命名為sfi1/17;同樣克隆Sfi1p的第17、18個(gè)重復(fù)序列的基因命名為SFI1/17-18及Cdc31p的全基因序列CDC31。并分別將其克隆至載體pGAD424和pGBT9上，構(gòu)建

4、載體pGAD424-sfi1/17、pGAD424-SFI1/17-18和pGBT9-CDC31。隨后采用酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)突變的Sfi1/17多肽與Cdc31p不能發(fā)生相互作用，野生型Sfi1/17-18多肽可與Cdc31p發(fā)生相互作用，因此，將664位苯丙氨酸突變?yōu)榘腚装彼岷笥绊懥薙fi1p生物功能的正常發(fā)揮。
　　 最后，本文還研究苯氧嘧啶類化合物和Taq DNA聚合酶的相互作用。通過用氟原子對(duì)化合物4-甲基-6-苯酚基-