兩個中國人手足裂畸形家系致病位點的定位和分析.pdf

1、目的：手足裂畸形（split-hand/split-foot malformation，SHFM）是一種嚴(yán)重影響患者精細活動的先天性肢端畸形。我們收集到兩個常染色體顯性遺傳中國人手足裂畸形家系，目的是鑒定這兩個家系的致病突變，揭示手足裂畸形發(fā)病的分子遺傳基礎(chǔ)，為患者及家系成員提供遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷服務(wù)。 方法：采集家系1五代15人（8名患者）和家系2三代8人（4名患者）的外周血，對先證者TP63基因的部分外顯子和側(cè)翼序列進行PC

2、R、直接測序分析。在4個已知的常染色體遺傳SHFM位點內(nèi)部及附近選擇微衛(wèi)星標(biāo)記，對家系1進行基因分型和連鎖分析。用illumina公司HumanLinkage-12 SNPs芯片對家系1進行全基因組掃描和連鎖分析，HumanHap550 SNPs芯片對兩個家系的先證者進行拷貝數(shù)改變分析。用實時熒光定量PCR技術(shù)對染色體10q24.3區(qū)域的片段重復(fù)進行驗證。應(yīng)用連鎖分析的方法為家系提供產(chǎn)前診斷。 結(jié)果：TP63基因未發(fā)現(xiàn)突變。家系

3、1的4個已知疾病位點微衛(wèi)星標(biāo)記連鎖分析兩點LOD值均小于1?；蛐酒蚪M掃描和連鎖分析在10q24.2-q25.1區(qū)域獲得了顯著性連鎖，多點LOD值3.01。拷貝數(shù)改變分析家系1先證者在10q24.3區(qū)域存在420，860 bp（chr10：102969197-103390056）的片段重復(fù)，包含了全部的LBX1、BTRC、POLL基因以及FBXW4基因的6至9號外顯子。家系2先證者該區(qū)域存在591，068 bp（chr10：102

4、887047-103478114）的片段重復(fù)，包含了全部的LBX1、BTRC、POLL、FBXW4基因。通過實時熒光定量PCR驗證，重復(fù)在家系1中與疾病共分離。單體型圖分析胎兒遺傳了先證者的致病單體型，推測胎兒為致病基因攜帶者的可能性大，B超證實胎兒為手足裂畸形。 結(jié)論： 1、建立了應(yīng)用基因芯片全基因組掃描和連鎖分析定位、克隆致病基因的方法。 2、確定了兩個手足裂家系的致病原因，10q24.3區(qū)域的片斷重復(fù)是導(dǎo)致