NT-3基因轉(zhuǎn)染在防治慶大霉素耳毒性作用的實驗研究.pdf

1、結(jié)論:一、通過RT-PCR,成功地從人的肝臟組織中克隆了NT-3-cDNA基因,并構(gòu)建了重組真核表達載體pIRES2-EGFP-NT-3.將該重組質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞系,建立了穩(wěn)定表達、分泌NT-3-cDNA蛋白的NIH3T3細(xì)胞系.二、在陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)下,分別以重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-NT-3轉(zhuǎn)染耳蝸內(nèi)不同組織細(xì)胞:原代成纖維細(xì)胞、雪旺細(xì)胞及耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,發(fā)現(xiàn):1.轉(zhuǎn)染后成纖維細(xì)胞形態(tài)無明顯改變,NT-3在成纖

2、維細(xì)胞中穩(wěn)定表達.2.NT-3基因轉(zhuǎn)染對雪旺細(xì)胞的生長有很好的促進作用.3.NT-3基因轉(zhuǎn)染對耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的生長有一定的促進作用;當(dāng)大量給與外源性的NT-3時,可以明顯減輕耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的退行性改變.三、將陽離子脂質(zhì)體-質(zhì)?；旌衔镂⒘孔⑷腚嗍笠粋?cè)耳蝸,經(jīng)聽功能測試及耳蝸組織學(xué)觀察,證實轉(zhuǎn)染是安全、有效的,轉(zhuǎn)染基因可持續(xù)表達4w以上,對豚鼠耳蝸形態(tài)及功能無明顯影響.四、將陽離子脂質(zhì)體-質(zhì)?；旌衔镂⒘孔⑷霊c大霉素致聾豚鼠一側(cè)耳蝸,