慶大霉素毒性機(jī)理及水楊酸對其拮抗作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文慶大霉素毒性機(jī)理及水楊酸對其拮抗作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名：陳賢明申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：王錦玲2000.5.1第四軍醫(yī)大學(xué)博士研究生學(xué)位論文在血管紋處染色較淺；NOS3在血管紋處染色較深，在Hensen細(xì)胞處不染色；NOS2不表達(dá)。GM組耳蝸NOSI和NOS3染色范圍與前者相似，只在某些部位染色加深；lmNOS2染色陽性。為觀察NO含量對GM耳毒性影響，將動物分成GM組；GMLArginine(高

2、水平)組；GML—NMMA0氐水平)組和對照組。檢測各組ABR反』Ⅳ閩、血清和耳蝸組織NO含量及耳蝸鋪片觀察。結(jié)果；各實(shí)驗(yàn)組ABR反應(yīng)閾均提高，高水平組ABR反應(yīng)閾提高顯著，低水平組ABR反應(yīng)閾提高較GM組低。GM組血清和耳蝸組織NO含量顯著升高，高水平組NO含量進(jìn)一步升高，低水平組NO含量減少。耳蝸鋪片顯示高水平組毛細(xì)胞損失較GM組和低水平組嚴(yán)重。結(jié)論：GM可誘導(dǎo)耳蝸NOS表達(dá)，NO含量增加可加重GM耳毒性，抑制NO生成可減輕其耳毒性

3、。三、慶大霉素及其代謝產(chǎn)物對豚鼠耳蝸外毛細(xì)胞[Ca2]i的影響對離體耳蝸外毛細(xì)胞經(jīng)鈣熒光指示劑F|uro3負(fù)載后，用激光掃描共聚焦顯微鏡測定了GM及GM代謝產(chǎn)物等不同成份對離體耳蝸外毛細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度的影響。結(jié)果：GM可引起[Cd】i短暫下降，并阻止高鉀液誘導(dǎo)的細(xì)胞去極化時鈣的內(nèi)流。GM與肝組織勻漿孵育后形成的GM代謝產(chǎn)物使[Ca”1i長時間升高，不阻止鉀誘導(dǎo)去極化時鈣的內(nèi)流。單純肝組織勻漿不引起[Caz1i變化。結(jié)論：GM引起離體耳蝸

4、毛細(xì)胞【Ca2’】i短暫下降，可能與GM急性耳毒性有關(guān)：GM代謝產(chǎn)物引起離體耳蝸毛細(xì)胞[Ca”1i持續(xù)升高，可能于GM慢性耳毒性作用有關(guān)。pq、慶大霉素誘導(dǎo)豚鼠耳蝸細(xì)胞凋亡本實(shí)驗(yàn)利用TUNEL原位雜交技術(shù)和透射電鏡觀察不同劑量GM注射后耳蝸組織細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：GM注射后耳蝸組織細(xì)胞凋亡增加，內(nèi)外毛細(xì)胞區(qū)、支持細(xì)咆區(qū)、耳蝸外側(cè)壁和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞均有凋亡。低劑量組凋亡細(xì)胞多，用藥早期凋亡細(xì)胞多。高劑量組凋亡細(xì)胞少，用藥后期凋亡細(xì)胞少，壞

5、死細(xì)胞增多。結(jié)論：GM可誘導(dǎo)耳蝸細(xì)胞凋亡，病變程度與用藥量和用藥時間有關(guān)。五、耳蝸及毛細(xì)胞體外培養(yǎng)觀察水楊酸鈉對慶大霉素耳毒性的抑制作用根據(jù)培養(yǎng)基所含成份不同分為5組，即GM組、GM代謝產(chǎn)物組、NaSA組、NaSAGM代謝產(chǎn)物組和對照組。將酶消化分離的豚鼠耳蝸外毛細(xì)胞在上述各培養(yǎng)鹱巾短期培養(yǎng)，光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，并結(jié)合熒光染色判斷細(xì)胞活性，兩種觀察結(jié)果進(jìn)行比較。另取耳蝸，在不去除蝸殼情況下置上述培養(yǎng)基中短期培養(yǎng)，臺盼蘭染色，觀察毛細(xì)胞