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文檔簡(jiǎn)介
1、一氧化氮(NO)和與其有關(guān)的活性氧基(ROS)在氨基甙類藥物引起的內(nèi)耳毛細(xì)胞死亡過(guò)程中起到重要作用。氨基甙類藥物可以激活過(guò)多的興奮性氨基酸受體(NMDA),并產(chǎn)生大量的NO,進(jìn)而轉(zhuǎn)化成為NO2,亞硝酸鹽,過(guò)氧亞硝酸鹽等化合物及活性氧基,可作用于酶,脂質(zhì),蛋白質(zhì)及DNA等大分子物質(zhì),產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用,導(dǎo)致內(nèi)耳形態(tài)改變和功能紊亂。有些學(xué)者認(rèn)為抗氧化劑可以預(yù)防或減輕這些活性氧基造成的內(nèi)耳損傷,為此,研究者用慶大霉素制作了氨基甙類藥物耳毒性動(dòng)物
2、模型,選擇高效抗氧劑α-硫辛酸加以保護(hù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:α-硫辛酸具有拮抗慶大霉素所致的內(nèi)耳毒性作用。 實(shí)驗(yàn)材料 1.取材與分組:耳廓反應(yīng)靈敏的成年Wistar大鼠25只,雌雄不限,體重350g-400g,隨機(jī)分組。 第一組:正常對(duì)照組只給0.9%氯化鈉注射劑 第二組:慶大霉素組只給GM100mg/kg 第三組:α-硫辛酸+慶大霉素組同時(shí)給GM100mg/kg+α-LA10mg/kg 2.主
3、要試劑及儀器:慶大霉素,α-硫辛酸,耳聲發(fā)射儀,解剖顯微鏡,顯微圖象采集系統(tǒng) 實(shí)驗(yàn)方法 GM組每日腹腔注射硫酸慶大霉素100mg/kg;GM+α-硫辛酸組每日同時(shí)腹腔注射硫酸慶大霉素100mg/kg和α-硫辛酸注射液10mg/kg;正常對(duì)照組每日腹腔注射等量生理鹽水。三組皆連續(xù)用藥10d。用藥前后測(cè)試DPOAE。第二次測(cè)試DPOAE后,將動(dòng)物斷頭取出聽(tīng)泡,暴露耳蝸。用4%多聚甲醛溶液灌流后固定3h后,5%硝酸溶液脫鈣72
4、h,蒸餾水沖洗,乙醇脫水,二甲苯透明,用石蠟浸蠟后包埋,在切片機(jī)下切片,厚度3μm,展片脫蠟后,常規(guī)HE染色,樹(shù)膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察毛細(xì)胞形態(tài)。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s)表示,用t檢驗(yàn),進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 DPOAE結(jié)果:停藥后兩組DPOAE幅值均有改變,慶大霉素+α-硫辛酸組DPOAE幅值有輕度降低;慶大霉素組DPOAE幅值明顯降低;兩組比較有顯著性差異(P<0.01)。慶大霉素+α-硫辛
5、酸組大鼠聽(tīng)功能受損程度明顯輕于慶大霉素組,且形態(tài)學(xué)改變與聽(tīng)閾變化相一致。正常對(duì)照組大鼠用藥前后DPOAE幅值及形態(tài)學(xué)無(wú)明顯變化。形態(tài)學(xué)觀察:給藥后慶大霉素組耳蝸底回外毛細(xì)胞數(shù)量明顯減少,有較多缺失。耳蝸底回血管紋細(xì)胞有水腫,前庭毛細(xì)胞空泡樣改變,纖毛倒伏缺失明顯。慶大霉素+α-硫辛酸組耳蝸底回外毛細(xì)胞有散在缺失,耳蝸底回血管紋細(xì)胞有輕度水腫,形態(tài)基本正常,前庭毛細(xì)胞散在缺失。正常對(duì)照組耳蝸底回外毛細(xì)胞形態(tài)正常,排列整齊,無(wú)明顯缺失,耳蝸
6、底回血管紋細(xì)胞形態(tài)正常,排列整齊,前庭毛細(xì)胞排列規(guī)整。 討論 該實(shí)驗(yàn)以DPOAE,光鏡下耳蝸的基底膜毛細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化為指標(biāo),觀察了α-硫辛酸對(duì)慶大霉素所致內(nèi)耳損害的影響。近年來(lái)研究表明氨基甙類抗生素可激活過(guò)多的興奮性受體(NMDA)并產(chǎn)生大量的NO,這些NO將轉(zhuǎn)化為NO2,亞硝酸鹽,過(guò)氧亞硝酸鹽等氧自由基,進(jìn)而使內(nèi)耳形態(tài)改變和功能紊亂。α-硫辛酸作為一種活性極強(qiáng)的抗氧劑,具有特殊的結(jié)構(gòu),可進(jìn)入細(xì)胞的脂質(zhì)和水質(zhì)部分,產(chǎn)生
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