MiR-181b-ERK-P53在冬凌草甲素對(duì)胰腺癌細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文論文題目：叢iB：呈壘呈墜堡B鯉量圣查釜凌堇里塞撾腿速疸答辯委員會(huì)主席：鱟邀≤逝江太堂險(xiǎn)屆箍二醫(yī)院≥答辯委員會(huì)成員：塞叢筮室≤漁趔醫(yī)堂院附屬箜三醫(yī)院≥韭住≤濕趔醫(yī)堂陵附屬箜三醫(yī)院≥溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文MiR181b／ERK／P53在冬凌草甲素對(duì)胰腺癌細(xì)胞凋亡中的作用中文摘要目的：l、觀察不同濃度冬凌草甲素在體外對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC一1細(xì)胞增殖、凋亡的影響以及對(duì)miRt81b在冬凌草甲素誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡中功能的

2、評(píng)價(jià)；2、在體內(nèi)，通過不同質(zhì)量濃度的藥物對(duì)裸鼠原位移植瘤模型的作用，對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)一步研究和論證。方法：l、在體外，培養(yǎng)人胰腺癌PANC1細(xì)胞。CCK8用于檢測冬凌草甲素的抗腫瘤細(xì)胞增殖。AnnexinVFITC／PI雙染流式細(xì)胞術(shù)用于細(xì)胞凋亡的檢測；其中MAPK抑制劑將用于對(duì)其機(jī)制的初步研究。細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的改變用倒置顯微鏡和熒光顯微鏡分析。細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)用于評(píng)價(jià)miR一181b的功能評(píng)價(jià)及相關(guān)指標(biāo)的測定。2、在體內(nèi)，建立胰腺癌裸鼠原位

3、移植瘤模型，分為四組：生理鹽水對(duì)照組(N組)、8mg／Kg冬凌草甲素組(08組)、16mg／Kg冬凌草甲素組(016組)和24mg／Kg冬凌草甲素組(024組)，各組通過腹腔注射給藥，每天一次，共持續(xù)給藥四周。藥物治療l周后處死裸鼠，檢測實(shí)驗(yàn)前后裸鼠體重變化。TUNEL法檢測移植瘤組織的細(xì)胞凋亡情況；WB和熒光定量PCR檢測Caspase8、Bax、pp38、p38、INK、pJNK、ERKI／2、pERK1／2、pp53等指標(biāo)的表達(dá)。

4、結(jié)果：1、冬凌草甲素在體外可誘導(dǎo)人胰腺癌細(xì)胞系PANC1的增殖抑制和凋亡。倒置顯微鏡可見細(xì)胞呈核皺縮、核裂解等凋亡征象；熒光顯微鏡可見細(xì)胞呈現(xiàn)早期和晚期凋亡之不同的改變。冬凌草甲素抑制PANC1細(xì)胞的增殖，且隨著濃度的增高、時(shí)間的延長，抑制越為明顯，且其50％抑制濃度(IC50)為169mol／l，與對(duì)照組相比各實(shí)驗(yàn)組統(tǒng)計(jì)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)。流式細(xì)胞術(shù)研究證實(shí)：冬凌草甲素可促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的凋亡，且具有藥物濃度依賴性；MEKl／