miR-223在胰腺癌細(xì)胞中表達(dá)及對增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響.pdf

1、目的:檢測miR-223在人胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況并研究miR-223對胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響,探索其作用機(jī)制。
　　 方法:以實時定量PCR(real-time PCR)檢測人胰腺癌細(xì)胞株中miR-223的表達(dá)情況；此后利用生物信息學(xué)方法和雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)尋找miR-223的靶基因；最后以miR-223類似物轉(zhuǎn)染胰腺癌T3M4細(xì)胞,以miR-223抑制物轉(zhuǎn)染胰腺癌SW1990細(xì)胞,采用CCK-8法檢測

2、細(xì)胞增殖,Annexin V/PI雙染法檢測分析細(xì)胞凋亡,流式細(xì)胞術(shù)檢測分析細(xì)胞周期變化。
　　 結(jié)果:miR-223在上述8株人胰腺癌細(xì)胞株中均有表達(dá),其中miR-223在Panc-1、BxPC-3、Capan-1、COLO357、SW1990、MiaPaCa-2中表達(dá)相對較高,而在AsPC-1、T3M4中表達(dá)相對較低;然后利用生物信息學(xué)方法從TargerScan、Miranda、Diana-MicroT、PicTar等預(yù)測軟

3、件中匯總分析并篩選出候選靶基因FOXO1a,雙熒光素酶報告基因檢測結(jié)果顯示FOXO1a組與陽性對照組相比相對熒光值降低,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。在SW1990中下調(diào)miR-223的表達(dá)可以抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖、使S期細(xì)胞比例減少,G1期、G2/M期未見規(guī)律性改變；在T3M4中上調(diào)miR-223的表達(dá)可以促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的增殖、使S期細(xì)胞比例增加,G1期細(xì)胞比例下降,G2/M期未見規(guī)律性改變；本次實驗通過上調(diào)或下調(diào)miR-223表達(dá)