冬凌草甲素通過MAPK-p38信號通路增強吉西他濱對胰腺癌的抗腫瘤活性.pdf

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文論文題目：璽凌堇里塞通過叢P墜衛(wèi)墨璺信墨通路增強直酉他答辯委員會主席：答辯委員會成員：論文答辯日期：2013年5月25日溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文冬凌草甲素通過MAPKp38信號通路增強吉西他濱對胰腺癌的抗腫瘤活性中文摘要目的探討冬凌草甲素在體內(nèi)外能否增強吉西他濱對胰腺癌抗腫瘤效應(yīng)及其可能的作用機制。方法在體外，不同濃度的冬凌草甲素(0uM，20uM，40uM，60ItM，80pM，100uM)作用胰腺癌BXPC3細(xì)胞

2、24h，48h，72h后，CCK一8法檢測胰腺癌細(xì)胞株BXPC3細(xì)胞的增值；冬凌草甲素(40pM)與吉西他濱(20uM)單獨及聯(lián)合處理細(xì)胞48小時，并設(shè)立對照組，采用AnnexinVFITC／PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡；流式細(xì)胞儀(FCM)檢測細(xì)胞周期的分布；運用RT—PCR檢測冬凌草甲素(4011M)單獨及聯(lián)合吉西他濱(20uM)作用48小時后BXPC3細(xì)胞中p38與p53基因的表達水平；蛋白印跡法(Westernblot)檢測冬

3、凌草甲素(40pM)單獨及聯(lián)合吉西他濱(20pM)作用48小時后BXPC一3細(xì)胞中p38與p53相應(yīng)蛋白的表達水平。在體內(nèi)，我們建立胰腺癌BXPC3細(xì)胞的裸鼠皮下移植瘤動物模型，待到腫瘤體積達到一定大小時，按照隨機區(qū)組設(shè)計分配分成4個實驗組：生理鹽水組(對照組)，吉西他濱組(80mg／kg)，冬凌草甲素組(40mg／kg)，聯(lián)合用藥組(吉西他濱80mg／kg冬凌草甲素40mg／kg)。每組IO只，各組給藥均采用腹腔注射的方法，每3天一次

4、，共11次。末次用藥結(jié)束2周后，取出腫瘤，測量腫瘤體積并稱腫瘤重量：Westernblot法檢測各組瘤組織中pp38和pp53蛋白的表達；采用RT—PCR檢測各組瘤組織中p38和p53基因的表達。結(jié)果冬凌草甲素抑制胰腺癌BXPC一3細(xì)胞的增值呈明顯的劑量與時間依賴性，冬凌草甲素作用胰腺癌細(xì)胞48小時后，IC50值為3886uM；運用AnnexinVHTC／PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果示：冬凌草甲素或吉西他濱單獨作用時，BXPC一3