龍葵堿誘導(dǎo)胰腺癌細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的:采用不同濃度的龍葵堿(Solanine)作用人胰腺癌細胞Panc-1,從細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、抑制率及凋亡率來研究龍葵堿對人胰腺癌細胞Panc-1的凋亡誘導(dǎo)作用。并通過檢測不同濃度龍葵堿作用Panc-1細胞后P53、Bcl-2和Bax的變化,探討龍葵堿誘導(dǎo)Panc-1細胞凋亡與P53、Bcl-2和Bax的表達的關(guān)系,以及在龍葵堿誘導(dǎo)細Panc-1胞凋亡機制中的作用。
　　 方法:通過倒置顯微鏡拍照觀察龍葵堿作用后Panc-1細胞的

2、形態(tài)學(xué)改變；CCK-8比色法檢測龍葵堿對Panc-1細胞增殖的抑制作用；用流式細胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡率；并以相對定量RT-PCR測定P53、Bcl-2和Bax的mRNA表達；蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測細胞凋亡調(diào)節(jié)基因P53和Bcl-2、Bax蛋白的表達。
　　 結(jié)果:龍葵堿顯著抑制人胰腺癌細胞Panc-1生長,并具有濃度時間依賴性。倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)隨著龍葵堿濃度增加和作用

3、時間延長,Panc-1細胞變圓、皺縮、漂浮并破碎,死亡逐漸增加；CCK-8比色法發(fā)現(xiàn)隨著龍葵堿濃度增加和作用時間延長,對Panc-1細胞的增殖抑制作用逐漸增強；流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)Panc-1細胞的凋亡率隨著龍葵堿濃度增加而逐漸增加；相對定量RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示龍葵堿能上調(diào)Panc-1細胞P53、Bax的mRNA和蛋白表達,表達量隨著龍葵堿濃度增大逐漸增多,同時下調(diào)Bcl-2 mRNA的和蛋白表達；表達量隨著龍葵