絲瓜絡(luò)多糖對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的:
　　本研究通過對(duì)絲瓜絡(luò)（Retinervus luffae fructus，RLF）多糖的提取條件進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)絲瓜絡(luò)多糖（Retinervus luffae fructus polysaccharide，RLFP）進(jìn)一步分離和純化。觀察RLF P對(duì)3 T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　方法:
　?。?）采用單因素法和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，確定RLFP的熱水浸提的最佳工藝參數(shù)。
　?。?）多

2、糖純化過程中，采用活性炭脫色，比較Sevag法、三氯乙酸法（TCA法）和酶法脫蛋白方法。
　?。?）DEAE-cellulose柱層析法對(duì)絲瓜絡(luò)多糖進(jìn)一步分離純化，通過紫外光譜和紅外光譜對(duì)得到的組份進(jìn)行初步理化性質(zhì)的分析。
　　（4）MTT法觀察不同濃度的絲瓜絡(luò)多糖對(duì)3 T3-L1前脂肪細(xì)胞活性的影響。
　?。?）油紅O染色法檢測(cè)絲瓜絡(luò)多糖對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響。
　?。?） RT-PCR法檢測(cè)絲瓜絡(luò)

3、多糖對(duì)3 T3-L1前脂肪細(xì)胞分化第8天脂肪分化轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ、PPARγ、C/EBPαmRNA的表達(dá)水平。
　　（7）Western blot檢測(cè)絲瓜絡(luò)多糖對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化第8天脂肪分化轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ、PPARγ、C/EBPα蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　?。?）通過對(duì)熱水浸提過程中影響多糖提取率的因素進(jìn)行單因素和正交試驗(yàn)分析，獲得最佳提取工藝條件為：以1:40的料液比，90℃條件下提取時(shí)間

4、6 h，提取1次。
　?。?）在絲瓜絡(luò)多糖的純化過程中，根據(jù)比較三種純化方法的多糖損失率和蛋白去除率，結(jié)果表明，Sevag法、TCA法和酶法的多糖損失率分別為29.3％、46.8%、18.7%，蛋白的去除率分別為78.9%、89.4%、72.8%。
　?。?）通過DEAE-cellulose柱層析，獲得兩個(gè)多糖組份，分別為絲瓜絡(luò)提取物Ⅰ（RLFⅠ）和絲瓜絡(luò)提取物Ⅱ（RLFⅡ），紅外光譜分析RLFⅠ含β-D吡喃葡萄糖。RLFⅡ

5、含吡喃環(huán)和呋喃環(huán)。
　?。?）MTT結(jié)果表明。RLFⅠ使3 T3-L1前脂肪細(xì)胞的活力下降。RLFⅡ?qū)? T3-L1前脂肪細(xì)胞的活力影響不明顯。
　　（5）油紅O染色顯示，RLFⅠ減少脂肪細(xì)胞甘油三酯的聚集（P<0.05）；RLFⅡ則無顯著效應(yīng)。
　?。?）RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，RLFⅠ處理組3T3-L1前脂肪細(xì)胞C/EBPβ、PPARγ和C/EBPαmRNA和蛋白的表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）。