深黃被孢霉發(fā)酵生產(chǎn)γ-亞麻酸及其分子遺傳學(xué)的研究.pdf

1、該文利用脈沖凝膠電泳(CHEF)系統(tǒng)首次確定了被孢霉屬中產(chǎn)GLA的深黃被孢霉AS3.3410(Mortierellaisabellina AS3.3410)及其誘變株M<,6-22)、MH<,23>以及不產(chǎn)GLA的拉曼被孢霉AS3.3413(Mortierella ramanniana AS3.3413)和葡酒色被孢霉AS3.3414(Mortierellavinacea AS3.3414)的染色體數(shù)目及基因組大小.該文在研究深黃被孢霉

2、基因組結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對(duì)γ-亞麻酸代謝過程中的關(guān)鍵酶——△<'6>-脂肪酸脫氫酶在基因水平上進(jìn)行了研究.△<'6>-脂肪酸脫氫酶是以亞油酸(C18:2△<'9,12>為底物,在C<,6>和C<,7>位之間脫氫 形成γ-亞麻酸(C18:3△<'6,9,12>),克隆到該基因?qū)μ岣逩LA產(chǎn)量,進(jìn)行基因工程菌的構(gòu) 建和轉(zhuǎn)基因植物具有重大意義,該論文將已發(fā)表的高等植物、動(dòng)物、藍(lán)細(xì)菌、真菌的△<'6>-脂肪酸脫氫酶序列進(jìn)行同源性比較,發(fā)現(xiàn)△<

3、'6>-脂肪酸脫氫酶具有三個(gè)組氨酸保守區(qū),但與其它位點(diǎn)的脂肪酸脫氫酶不同的是,△<'6>-脂肪酸脫氫酶在N端特有細(xì)胞色素b<,5>(Cytb<,5>)區(qū),因此,研究人員根據(jù)Cytb<,5>區(qū)的HPGG和組氨酸保守區(qū)ⅢQIEHHLFP的氨基酸序列 設(shè)計(jì)引物,提取深黃被孢霉的總RNA,進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,將擴(kuò)增出的DNA片段進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化、最后對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定和測(cè)序.該論文在研究深黃被孢霉生產(chǎn)GLA的發(fā)酵工藝基礎(chǔ) 上,對(duì)該菌株進(jìn)行了