Peroxiredoxin6及其相關(guān)iPLA2活性在腦缺血再灌注中所起作用及其機制的研究.pdf

1、背景：
　　氧化應激是造成腦缺血再灌注損傷的關(guān)鍵因素。內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)含有谷胱甘肽還原酶系統(tǒng)、超氧化物岐化酶(SOD)系統(tǒng)、抗氧化蛋白Peroxiredoxins(Prdxs)系統(tǒng)、硫氧還蛋白/硫氧還蛋白還原酶系統(tǒng)(Trx/TrxR)等等。Prdx6蛋白具有非硒依賴性谷胱甘肽過氧化物酶(NSGPx)和非鈣依賴性磷脂酶(iPLA2)雙重活性。帕金森病、雅克病、匹克病、肺惡性間皮細胞瘤、鱗狀上皮細胞癌、皮膚傷口愈合區(qū)、實驗性早衰細胞等

2、都已發(fā)現(xiàn)與Prdx6蛋白的表達有關(guān)，且多與Prdx6的過氧化物酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化有關(guān)。目前，對 Prdx6-iPLA2活性在腦缺血疾病中的作用卻研究甚少。
　　目的：
　　探討Peroxiredoxin6(Prdx6)及其相關(guān)iPLA2活性在腦缺血再灌注損傷中的作用及其機制。
　　方法：
　?、賹⒋笫箅S機(n=16)分為 Sham組、MCAO組、Scramble組、Prdx6-siRNA組和MJ33組；

3、>　?、跇?gòu)建化學合成的Prdx6-siRNA一條，亂序Prdx6-siRNA一條作為陰性對照。Prdx6-siRNA組側(cè)腦室注射8μl的 Prdx6-siRNA， Prdx6-siRNA+MJ33組側(cè)腦室注射8μl的 Prdx6-siRNA并尾靜脈注射MJ33(0.5μmol/kg)，Scramble組側(cè)腦室注射其亂序 siRNA，余兩組均只進行定位后顱骨鉆孔，并不注射；
　　③側(cè)腦室注射24h后采用中腦動脈栓塞（MCAO）模型誘

4、導SD大鼠左側(cè)腦皮質(zhì)缺血再灌注，其中Sham組僅做手術(shù)切口，不插入線栓；
　?、苣X缺血再灌注損傷24h時，測定各組神經(jīng)功能學評分、腦含水量和腦梗死體積，并通過WB和Real-time qPCR測腦組織中Prdx6， ELISA檢測各組iPLA2活性；
　?、萃ㄟ^ HE和亞甲藍染色法檢測大腦皮質(zhì)缺血再灌注區(qū)神經(jīng)元的損傷情況；
　?、尥ㄟ^檢測SOD活性和MDA含量來評價各組的氧化活性，并通過WB、real-time qPC

5、R檢測caspase3，結(jié)合TUNLE染色探討相關(guān)凋亡情況；
　　⑦通過WB檢測各組炎癥相關(guān)TLR2/4信號通路的NF-?B、iNOS、COX2蛋白的表達水平，ELISA檢測IL-1β、IL-17和IL-23的含量。
　　結(jié)果：
　?、偕窠?jīng)功能學評分、缺血側(cè)腦含水量和腦梗死體積：與MCAO組比， Prdx6-siRNA組和 Prdx6-siRNA+MJ33組均明顯增加， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-

6、siRNA組比有所減少，且各變化均具有統(tǒng)計意義；
　?、赑rdx6的表達及iPLA2活性：與MCAO組比，Prdx6-siRNA組和 Prdx6-siRNA+MJ33組均明顯降低， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-siRNA組比進一步減少，且各變化均具有統(tǒng)計意義；
　?、跦E和亞甲藍染色顯示腦缺血區(qū)神經(jīng)元損傷：與MCAO組比， Prdx6-siRNA組和Prdx6-siRNA+MJ33組均明顯增加，Prdx6

7、-siRNA
　　+MJ33組與Prdx6-siRNA組比有所減少，且各變化具有統(tǒng)計意義；
　?、躍OD活性和 MDA含量：與 MCAO組比，Prdx6-siRNA組和Prdx6-siRNA+MJ33組SOD活性均明顯減少，MDA含量均顯著增加， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-siRNA組比SOD活性有所增加，MDA含量有所減少，且各變化具有統(tǒng)計意義；
　?、軹UNLE染色和caspase3表達：與M

8、CAO比，Prdx6-siRNA組和Prdx6-siRNA+MJ33組均明顯增加， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-siRNA組比有所減少，且各項變化具有統(tǒng)計學意義；
　?、奕毖笱装Y相關(guān)TLR2/4通路各因子的表達：與MCAO組比， Prdx6-siRNA組和 Prdx6-siRNA+MJ33組各蛋白含量均明顯增加， Prdx6-siRNA+MJ33組與Prdx6-siRNA組比有所減少，且各變化具有統(tǒng)計學意義。