脂氧素A4對(duì)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株增殖及IL-6-VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的：皮膚鱗狀細(xì)胞癌(Cutanous squamous cell carcinoma，CSCC)是一種高度惡性的非黑色素瘤，來源于表皮或附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞，其發(fā)病率較高。具有惡性程度高、生長(zhǎng)迅速、易發(fā)生轉(zhuǎn)移、病因不明等特點(diǎn)。因此，對(duì)于CSCC的病因研究尤為重要。脂氧素（Lipoxins,LXs）是一類脂氧合酶作用于花生四烯酸后的代謝產(chǎn)物，具有促進(jìn)炎癥消退的作用，在多種腫瘤實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出抗腫瘤特性。脂多糖（lipopoysaccharid

2、e,LPS）能導(dǎo)致炎癥發(fā)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)及瀑布效應(yīng)，而炎癥又與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切關(guān)系。因此，本實(shí)驗(yàn)通過體外研究脂氧素A4(Lipoxin A4，LXA4）對(duì)LPS刺激的人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，探討其抗CSCC的作用機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用免疫組化SP法分別檢測(cè)正常皮膚和CSCC組織中脂氧素A4受體（lipoxin A4 receptor, ALX）的表達(dá)水平。體外培養(yǎng)A431細(xì)胞后進(jìn)行以下分組：對(duì)照組(完全培養(yǎng)基

3、)、LXA4組(800nM)、LPS組(1ug·ml－1)、LXA4（800nM）+LPS(1ug·ml－1)共刺激組、LXA4（800nM）+LPS(1ug·ml－1)+PTX（0.1mg.l－1）共刺激組5個(gè)組。分別采用 MTT法檢測(cè)A431細(xì)胞增殖活性;酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)(Enzyme-linked immunosor-bent assay，ELISA)A431細(xì)胞上清液中白介素-6（Interleukin-6,IL-6）/血管內(nèi)皮

4、生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF）分泌水平；Western blotting法檢測(cè)IL-6/VEGF蛋白的表達(dá)量；RT-qPCR檢測(cè)IL-6/VEGF mRNA的表達(dá)量。所有數(shù)據(jù)均采用 SPSS17.0軟件和graphpad prism5軟件處理并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：一、免疫組化結(jié)果顯示，在CSCC組織中的ALX表達(dá)低于正常組織中的表達(dá)。二、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1）當(dāng)時(shí)間

5、一定時(shí)，A431細(xì)胞的增殖伴隨著藥物(LXA4)濃度的增強(qiáng)而被抑制，呈現(xiàn)量效-依賴性；當(dāng)一定藥物(LXA4)濃度作用下，A431細(xì)胞的抑制率隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，即顯示有時(shí)間-依賴性。（2）作用24時(shí)，LXA4組低于正常對(duì)照組（P＞0.05）， LPS+LXA4組低于正常對(duì)照組（p＞0.05）。作用48h時(shí)，LXA4組低于正常對(duì)照組（P＜0.001），LPS組高于正常對(duì)照組（P＜0.05），LPS+LXA4共刺激組低于單純LPS刺激

6、組(P＜0.001）， LPS+LXA4+PTX組高于LPS+LXA4刺激組（P＜0.001）。作用72h時(shí)，LXA4組低于正常對(duì)照組（P＜0.001），LPS組高于正常對(duì)照組（P＜0.01），LPS+LXA4共刺激組低于LPS刺激組（P＜0.001），LPS+LXA4+PTX組高于LPS+LXA4刺激組（P＞0.05）。三、ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果：LXA4組中IL-6/VEGF水平均較正常對(duì)照組表達(dá)下降（P＜0.05）；LPS組中IL-6

7、/VEGF水平均較正常對(duì)照組表達(dá)升高(P＜0.05)；LPS+LXA4組中IL-6/VEGF水平較LPS組表達(dá)下降(P＜0.05)；LXA4+LPS+PTX組中IL-6/VEGF較LPS+LXA4組表達(dá)有所上升(P＜0.05)。四、Western blotting及RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果：LXA4組IL-6/VEGF蛋白、mRNA水平表達(dá)下降（P＞0.05）；LPS組IL-6/VEGF蛋白、mRNA水平均增高(P＜0.05)；LXA4+L

8、PS組IL-6/VEGF蛋白、mRNA水平表達(dá)較LPS組有所下降（P＜0.05）；LXA4+LPS+PTX組IL-6/VEGF蛋白、mRNA表達(dá)較LPS+LXA4組水平上升(P＜0.05)。
　　結(jié)論：1、ALX可能在CSCC組織中較正常組織低表達(dá)。2、LXA4作用A431細(xì)胞后，對(duì)A431細(xì)胞的增殖抑制呈時(shí)間-濃度依賴性；3、LPS對(duì)A431細(xì)胞有一定程度的誘導(dǎo)作用。4、LPS與LXA4共刺激時(shí)表現(xiàn)一定程度上的拮抗作用，且LXA