黃芩素對(duì)食管癌EC-109細(xì)胞株增殖及細(xì)胞周期的影響.pdf

1、背景及目的：近年來(lái)脂氧化酶（LOX 及其代謝產(chǎn)物羥基二十碳四烯酸（HETE與腫瘤的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系越來(lái)越受到重視。12-LOX 作為脂氧合酶家族的一員，是催化AA 轉(zhuǎn)化為12-羥廿碳四烯酸（12-HETE的關(guān)鍵酶，而12-HETE與12-LOX 一起，通過(guò)各種機(jī)制共同參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。兩者與惡性腫瘤的關(guān)系已成為研究重點(diǎn)。
　　 黃芩素（baicalein BAI 是從唇形科植物黃芩中提取出來(lái)的具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗變態(tài)反

2、應(yīng)、抗氧化、清除氧自由基、抗癌、抗凝、抗血栓形成和保護(hù)肝臟、心腦血管、神經(jīng)元等多種藥理活性等的黃酮類(lèi)化合物。有關(guān)黃芩素的一些制劑已在臨床應(yīng)用于上呼吸道感染、急性扁桃體炎、咽炎、慢性阻塞性肺病、傳染性肝炎、急慢性胃腸炎、細(xì)菌性痢疾、腎盂腎炎等多種疾病的治療，并顯示出較好的療效。近年來(lái)，隨著中藥抗癌研究的深入，黃芩素抗腫瘤的機(jī)制得到大量研究，結(jié)果表明，作為12-脂氧化酶（12-LOX抑制劑，黃芩素可抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖，包括胰腺癌、肝癌、前

3、列腺癌、卵巢癌等，而對(duì)食管癌細(xì)胞是否具有生長(zhǎng)抑制作用及其機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在探討12-脂氧化酶（12-LOX 抑制劑黃芩素對(duì)人食管癌EC-109 細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響及可能的機(jī)制，為黃芩素的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。
　　 材料和方法：
　　 體外培養(yǎng)的人食管癌EC-109 細(xì)胞，用含不同濃度黃芩素（0510204080mol/L的培養(yǎng)基處理，倒置相差顯微鏡觀察EC-109 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；噻唑藍(lán)比色法（M

4、TT 法）檢測(cè)黃芩素對(duì)食管癌細(xì)胞增殖的影響；經(jīng)碘化丙啶（PI染色后，用流式細(xì)胞分析儀（FCM檢測(cè)黃芩素對(duì)EC-109 細(xì)胞周期的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.置相差顯微鏡下觀察未經(jīng)黃芩素干預(yù)的細(xì)胞包膜完整，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，狀態(tài)良好。以不同濃度黃芩素作用后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化。當(dāng)?shù)蜐舛惹易饔脮r(shí)間較短時(shí)，細(xì)胞體積稍增大、變得扁平。當(dāng)作用時(shí)間達(dá)48 小時(shí)后，細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)皺縮，偽足形成，細(xì)胞折光性差，模糊，與周?chē)?xì)胞分離，形態(tài)

5、不規(guī)則，且隨濃度增加可見(jiàn)部分細(xì)胞呈“發(fā)芽”狀態(tài)改變，類(lèi)似凋亡細(xì)胞形態(tài)改變，最終漂浮。給予大劑量黃芩素與細(xì)胞一起培養(yǎng)，細(xì)胞在短時(shí)間內(nèi)縮小、脫落、漂浮，產(chǎn)生許多細(xì)胞碎片，可能形成細(xì)胞壞死。
　　 2.用MTT 法研究黃芩素對(duì)EC-109 細(xì)胞的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃芩素對(duì)EC-109 細(xì)胞有細(xì)胞毒性作用，能抑制細(xì)胞增殖，且隨著黃芩素終濃度（0510204080mol/L增加和作用時(shí)間（244872h的延長(zhǎng)，細(xì)胞存活率明顯下降，24h后分

6、別為98.4、87.7、87.6、81.9、79.0 ；48h后分別為71.6、67.6、64.1、60.0、46.7％；72h后分別為43.8、43.1、43.1、40.0、23.0。與對(duì)照組相比，這種抑制作用呈一定的時(shí)間、濃度依賴(lài)性。
　　 3.式細(xì)胞術(shù)PI 單染法檢測(cè)黃芩素對(duì)EC-109 細(xì)胞周期的影響，結(jié)果顯示，0510204080mol/L的黃芩素作用于EC-109 細(xì)胞24h后，隨著黃芩素濃度的增高，G1期細(xì)胞的比例