穿心蓮內(nèi)脂對(duì)人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞株增殖和抑制影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究的背景和目的:
　　目前舌鱗狀細(xì)胞癌在口腔癌中的發(fā)病率最高，不斷尋找新的安全有效的抗腫瘤藥物具有重要的意義，近年來中草藥中的抗腫瘤藥物成為了研究的熱點(diǎn)。穿心蓮(Andrographis paniculate Ness)是一種爵科植物，現(xiàn)已有許多國(guó)家在研究使用。研究發(fā)現(xiàn)穿心蓮中的穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide，AD）不但有抗炎、抗菌、抗病毒作用，還有較強(qiáng)的抗腫瘤作用。目前AD還未用于舌鱗癌的研究，做此研究有積極的現(xiàn)實(shí)

2、意義。本研究目的在于檢測(cè)AD對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期和BaxmRNA、Bcl-2mRNA表達(dá)的影響，從凋亡基因Bax、Bcl-2mRNA的表達(dá)情況來探討AD可能的作用機(jī)制，為AD可能成為臨床上治療舌鱗癌的新藥物提供了一定依據(jù)。
　　研究?jī)?nèi)容和方法:
　　1.人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞在常規(guī)條件下培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
　　2.分別加入濃度為0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、4

3、0μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的AD作用于Tca8113細(xì)胞，分別繼續(xù)培養(yǎng)24h和48h后，用MTT法檢測(cè)AD對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制作用。
　　3.分別加入濃度為0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113細(xì)胞，分別繼續(xù)培養(yǎng)24h和48h后，用流式細(xì)胞儀分析AD對(duì)細(xì)胞周期的影響。
　　4.分別加入濃度為0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用

4、于Tca8113細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)24h后，用RT-PCR法檢測(cè)AD對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞Bax、Bcl-2 mRNA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.MTT結(jié)果顯示，AD作用Tca8113細(xì)胞后，能夠顯著地抑制細(xì)胞的增殖;分別加入濃度為0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的AD作用Tca8113細(xì)胞24h后，細(xì)胞的抑制率分別為（0±0）％，（2.37±0.19）％

5、，(11.34±1.01)％，(36.65±1.99)％，（49.61±3.34)％，（72.11±5.01)％;AD作用Tca8113細(xì)胞48h后，細(xì)胞的抑制率分別為（0±0）％，（11.37±1.01）％，（27.43±1.93）％，(46.08±3.28)％，(65.59±6.33)％，(79.47±7.33)％。Tca8113細(xì)胞在AD作用相同的時(shí)間里，隨著實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)AD濃度的增加，細(xì)胞的抑制率逐漸升高(P＜0.05);而同

6、一AD濃度組的細(xì)胞被AD作用48h的抑制率比作用24h的抑制率高(P＜0.05)，具有明顯的劑量-時(shí)間依賴性。利用SPSS軟件計(jì)算出舌鱗癌細(xì)胞被AD作用24h后的IC50值為74.66μg/ml。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)(FCM)結(jié)果顯示，濃度分別為0μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的AD作用于Tca8113細(xì)胞24h后，細(xì)胞周期中的G0/G1期細(xì)胞比例分別為（39.45±0.56）％，（49.10±0.81）％，（56.6

7、1±0.64）％，S期細(xì)胞比例分別為（56.55±0.53）％，（46.57±0.60）％，（36.86±0.73）％。不同濃度的AD作用Tca8113細(xì)胞48h后，細(xì)胞周期中的G0/G1期細(xì)胞比例分別為（40.16±1.03）％，（57.34±0.65）％，（63.70±0.65）％，S期細(xì)胞比例分別為(58.31±0.75)％，（37.23±0.76）％，(32.28±0.54)％。Tca8113細(xì)胞在AD作用相同的時(shí)間內(nèi)，隨著AD

8、濃度的增加，G0/G1期細(xì)胞分布比例升高(P＜0.01)，S期的細(xì)胞降低(P＜0.01);細(xì)胞在相同濃度AD的作用下，隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，G0/G1期的細(xì)胞分布比例升高(P＜0.01)，而S期的細(xì)胞分布比例降低(P≤0.01);對(duì)照組（0μg/ml）細(xì)胞在培養(yǎng)24h與48h后，舌鱗癌細(xì)胞周期的分布變化不大，(P＞0.05)。
　　3.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，AD濃度分別為0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、

9、40μg/ml作用于Tca8113細(xì)胞24h后，BaxmRNA的表達(dá)量分別為0.383±0.013，0.513±0.021，0.631±0.036，0.733±0.042，0.916±0.048;Bcl-2mRNA的表達(dá)量分別為1.137±0.016，0.913±0.025，0.570±0.030，0.403±0.032，0.333±0.025。AD能夠促進(jìn)細(xì)胞中BaxmRNA表達(dá)，抑制Bcl-2mRNA表達(dá)（P＜0.05），并具有劑量