獨(dú)一味石油醚提取物對(duì)人舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞株增殖的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　1.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥铮╬etroleum ether extract of Lamiophlomis rotate,PEELR）對(duì)Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞活性及增殖能力的影響。
　　2.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳?duì)Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞克隆形成能力的影響。
　　3.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳?duì)Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞凋亡的影響。
　　4.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳?duì)小鼠成纖維小包 L929細(xì)胞株細(xì)胞毒性的

2、影響。
　　5.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳?duì)Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響。
　　6.探討?yīng)氁晃妒兔烟崛∥飳?duì)Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞中BAX，Bcl-2與Casepase3的蛋白表達(dá)量的影響。
　　方法：通過(guò)磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B，SRB）比色法、生長(zhǎng)能力觀察、細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、Annexin V/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡和流式細(xì)胞術(shù)來(lái)檢測(cè)Tca8113細(xì)胞株的細(xì)胞生長(zhǎng)能力、增殖活力及凋亡比例，設(shè)

3、置獨(dú)一味石油醚提取物（petroleum ether extract of Lamiophlomis rotate,PEELR）實(shí)驗(yàn)組、空白對(duì)照組,以博來(lái)霉素（bleomycin,BLM，10μg/mL)作為藥物對(duì)照組，以小鼠成纖維細(xì)胞L929細(xì)胞株作為細(xì)胞對(duì)照組檢測(cè)PEELR毒性。經(jīng)Hoechst/PI雙染法觀察Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞總數(shù)及凋亡、壞死細(xì)胞比例。經(jīng)細(xì)胞周期檢測(cè)分析細(xì)胞周期阻滯情況。蛋白免疫印跡法（Wester

4、n blot）對(duì)Tca8113細(xì)胞中P53，BAX，Bcl-2與Casepase3蛋白表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1.24h SRB比色法和Tca8113細(xì)胞株生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示：24h的IC50=66.388μg/mL，PEELR藥物濃度與對(duì)Tca8113細(xì)胞的增殖抑制率呈正相關(guān)；低濃度PEELR（25μg/mL和50μg/mL）對(duì)Tca8113細(xì)胞的生長(zhǎng)能力與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）；中濃度 PEEL

5、R（100μg/mL）和高濃度PEELR藥物（200μg/mL和400μg/mL）對(duì)Tca8113細(xì)胞株的長(zhǎng)期增殖抑制作用與對(duì)照藥物組BLM(10μg/mL)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）
　　2.細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)表明：隨著PEELR濃度的增大，Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞的克隆形成率（即增殖能力）逐漸減小；不同濃度PEELR藥物對(duì)Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞均有顯著的增殖抑制效果（P＜0.01）；中濃度PEELR（100μg/mL

6、）和高濃度PEELR藥物（200μg/mL）對(duì)Tca8113細(xì)胞株的克隆形成能力與對(duì)照藥物組BLM(10μg/mL)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3.Annexin V/PI雙染細(xì)胞凋亡比例檢測(cè)顯示：PEELR可以誘導(dǎo)Tca8113細(xì)胞株細(xì)胞發(fā)生凋亡；PEELR濃度與誘導(dǎo)凋亡能力呈正相關(guān)；與BLM（10μg/mL）組相比，PEELR組（50μg/mL和100μg/mL）無(wú)顯著差異（P＞0.05）；與空白對(duì)照組相比，P

7、EELR組的Tca8113細(xì)胞系晚期凋亡和壞死發(fā)生率均有極其顯著差異（P＜0.01）；與BLM（10μg/mL）組相比 PEELR組的Tca8113細(xì)胞系晚期凋亡和壞死發(fā)生率均有顯著差異（P＜0.05）。而不同濃度PEELR組相比均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　4.細(xì)胞毒性試驗(yàn)顯示：24h的IC50=294.119μg/mL；低、中濃度PEELR對(duì) L929細(xì)胞系的影響與空白對(duì)照組，藥物對(duì)照組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）；高

8、濃度PEELR對(duì)L929細(xì)胞系有抑制作用，呈正相關(guān)。
　　5.隨著PEELR藥物濃度的增加，同一視野范圍內(nèi)細(xì)胞總數(shù)呈負(fù)相關(guān)，而凋亡、壞死細(xì)胞比例呈正相關(guān)。PEELR組正常細(xì)胞無(wú)明顯形態(tài)的變化，凋亡細(xì)胞可見(jiàn)細(xì)胞核皺縮。PEELR組凋亡細(xì)胞比率顯著大于壞死細(xì)胞比率（P＜0.01）。
　　6.隨著PEELR藥物濃度的增大，其作用24h的Tca8113細(xì)胞系細(xì)胞周期的SPF指數(shù)和PI增殖指數(shù)均減小。
　　7.Western b

9、lt實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：BAX和Casepase-3的蛋白表達(dá)量隨PEELR藥物濃度增大而增大，Bcl-2的蛋白表達(dá)量隨 PEELR藥物濃度增大而減小。PEELR各個(gè)藥物組均可以降低 Bcl-2/BAX表達(dá)比率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；Bcl-2/BAX表達(dá)比率的大小與PEELR藥物濃度呈負(fù)相關(guān)；高濃度PEELR（150μg/mL、200μg/mL）組的Bcl-2/BAX表達(dá)比率小于1。
　　結(jié)論：PEELR對(duì)體外培養(yǎng)的人舌