蠐螬提取物對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞株抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用的研究.pdf

1、目的：研究蠐螬提取物對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞株的抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡作用，并探討其作用機(jī)制，為新藥開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 方法：應(yīng)用MTT法檢測(cè)蠐螬提取物對(duì)體外培養(yǎng)的人宮頸癌HeLa細(xì)胞株的抑制增殖作用的影響及細(xì)胞毒活性；通過(guò)倒置顯微鏡、HE染色、油紅“O”染色法、透射電鏡的方法觀察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變；應(yīng)用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的脫氧核苷酸缺口末端標(biāo)記(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,

2、TUNEL)法檢測(cè)蠐螬提取物對(duì)細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的情況；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)HeLa細(xì)胞的細(xì)胞周期分布相和細(xì)胞凋亡率；通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)S-P法測(cè)定凋亡關(guān)鍵效應(yīng)酶Caspase-8和Caspase-3與凋亡相關(guān)基因產(chǎn)物p53、bcl-2、Bax、Fas蛋白的表達(dá)情況，深入探討蠐螬提取物對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制。 結(jié)果：(1)MTT比色法結(jié)果表明：蠐螬乙酸乙酯、氯仿和石油醚三種提取物中以石油醚提取物增殖抑制效果最佳。蠐螬石油醚

3、提取物對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞株的增殖抑制作用呈劑量依賴(lài)性(P＜0.01)，同時(shí)呈時(shí)間依賴(lài)性(P＜0.01)；(2)倒置顯微鏡觀察：蠐螬石油醚提取物50μg/ml作用后早期細(xì)胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)變化細(xì)胞膜鼓泡、凋亡小體形成等；作用晚期細(xì)胞發(fā)生膜破裂壞死；(3)HE染色：蠐螬石油醚提取物50μg/ml作用細(xì)胞后出現(xiàn)典型凋亡形態(tài)變化凋亡小體形成、細(xì)胞核濃縮呈藍(lán)黑色、胞漿呈淡紅色等，核染色質(zhì)濃縮、呈碎塊狀；(4)油紅“O”染色觀察蠐螬石油醚提取物5

4、0μg/ml作用細(xì)胞后胞漿中存在大小不等的紅色圓形脂肪滴圍繞在核周出現(xiàn)；(5)透射電鏡觀察結(jié)果：蠐螬石油醚提取物50μg/ml作用細(xì)胞后出現(xiàn)核染色質(zhì)致密濃縮或斷裂，形成大小不等的凋亡小體；部分細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)脂滴儲(chǔ)積，細(xì)胞發(fā)生脂肪變性；(6)TUNEL法檢測(cè)結(jié)果：蠐螬石油醚提取物作用細(xì)胞后凋亡細(xì)胞數(shù)目隨時(shí)間延長(zhǎng)而增多；加藥組凋亡率與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.01)，同時(shí)凋亡指數(shù)呈時(shí)間依賴(lài)性和劑量依賴(lài)性；(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示：

5、蠐螬提取物可以誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞發(fā)生凋亡，加藥組出現(xiàn)亞二倍體峰，并且Go/G1期細(xì)胞比例顯著增加(P＜0.01)，而S期和G2/M期細(xì)胞比例則明顯下降，將細(xì)胞阻滯在Go/G1期；(8)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果表明：蠐螬石油醚提取物作用后加藥組Caspase-8和Caspase-3表達(dá)增加，p53、bcl-2蛋白隨提取物濃度表達(dá)均降低，Bax和Fas蛋白表達(dá)增加，與對(duì)照組相比較均有顯著差異(P＜0.01)。 結(jié)論： 1、蠐螬乙酸乙酯

6、、氯仿和石油醚三種提取物對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞株具有抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡作用，其中以石油醚提取物增殖抑制作用效果最佳。 2、蠐螬石油醚提取物對(duì)HeLa細(xì)胞抑制增殖作用在粗提物50μg/ml作用48h之前主要以誘導(dǎo)凋亡為主，在其后時(shí)間以誘發(fā)腫瘤細(xì)胞脂肪變性和壞死為主。 3、蠐螬石油醚提取物誘導(dǎo)凋亡作用機(jī)制可能與細(xì)胞周期發(fā)生Go/G1期阻滯有關(guān)；并且通過(guò)下調(diào)p53、bcl-2蛋白表達(dá)，上調(diào)Bax、Fas、Caspase-8和C