虎杖提取物對人肺癌A549細胞株抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用的研究.pdf

1、目的：研究虎杖提取物對人肺癌A549細胞株的抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡作用，并探討其作用機制，為新藥開發(fā)提供實驗和理論依據(jù)。 方法：應(yīng)用MTT法檢測虎杖提取物對體外培養(yǎng)的人肺癌A549細胞株的抑制增殖作用的影響及細胞毒活性；通過倒置顯微鏡、HE染色、AO/EB熒光顯微鏡的方法觀察腫瘤細胞的形態(tài)改變；應(yīng)用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的脫氧核苷酸缺口末端標(biāo)記(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TU

2、NEL)法檢測虎杖提取物對細胞誘導(dǎo)凋亡的情況；采用流式細胞儀檢測A549細胞株的細胞周期分布相和細胞凋亡率；通過免疫細胞化學(xué)S-P法測定凋亡關(guān)鍵酶Caspase-3,Caspase-8和Caspase-9與凋亡相關(guān)基因產(chǎn)物bcl-2，以及與細胞周期有關(guān)的p21 ras、Ki-67蛋白的表達情況，深入探討虎杖提取物對人肺癌細胞株誘導(dǎo)凋亡的機制。 結(jié)果：(1)MTT法檢測結(jié)果表明：虎杖提取物在體外對A549人肺癌細胞株有明顯的抑制增

3、殖作用，實驗組與對照組相比其生長抑制率有顯著性差異(p<0.01)，而且這種抑制作用呈現(xiàn)濃度和時間的依賴性；(2)倒置顯微鏡觀察：虎杖提取物40μg/ml作用后早期細胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)變化細胞膜出泡、凋亡小體形成等；作用晚期細胞發(fā)生膜破裂壞死；(3)HE染色：虎杖提取物40μg/ml作用細胞后出現(xiàn)典型凋亡形態(tài)變化凋亡小體形成、細胞核濃縮呈藍黑色、胞漿呈淡紅色等，核染色質(zhì)濃縮、呈碎塊狀；(4)AO/EB熒光顯微鏡：實驗組出現(xiàn)凋亡細胞；(5)

4、TUNEL法檢測結(jié)果：虎杖提取物40μg/ml作用細胞后凋亡細胞數(shù)目隨時間延長而增多；加藥組凋亡率與對照組相比有顯著差異，同時凋亡指數(shù)呈時間依賴性和劑量依賴性；(6)流式細胞儀檢測結(jié)果顯示：虎杖提取物可以誘導(dǎo)A549細胞凋亡，加藥組出現(xiàn)G<,0>/G<,1>期和G<,2>/M期細胞比例顯著增加(p<0.01)，而S期細胞比例則明顯下降，將細胞阻滯在G<,0>/G<,1>期：(7)免疫組化化學(xué)結(jié)果表明：虎杖提取物作用后加藥組Caspase

5、-3,Caspase-8和Caspase-9表達增強，Ki-67、p21 ras蛋白隨提取物濃度表達均降低，與對照組相比較均有顯著性差異(p<0.01)。 結(jié)論： 1．虎杖提取物在體外對人肺癌A549細胞株有顯著的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用。 2．虎杖提取物抑制增殖作用機制可能與下調(diào)Ki-67,p21 ras蛋白表達，細胞周期發(fā)生G0/G1期阻滯有關(guān)。 3．虎杖提取物誘導(dǎo)凋亡作用機制可能與下調(diào)bcl-2蛋白表