蝙蝠葛活性成分對人肺癌A549細胞株誘導凋亡和抗增殖作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討蝙蝠葛活性成分對人肺癌A549細胞株誘導凋亡和抗增殖作用及其機制，為開發(fā)抗腫瘤新中藥提供實驗依據(jù)。
　　方法：應用MTT法測定蝙蝠葛活性成分對人肺癌A549細胞株的生長抑制作用；通過倒置顯微鏡、光學顯微鏡、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色熒光顯微鏡觀察腫瘤細胞凋亡的形態(tài)學變化；采用流式細胞儀檢測A549細胞的周期分布相和細胞凋亡率；應用免疫細胞化學技術檢測藥物處理前后增殖細胞核抗原 Ki-67及凋亡相關蛋白酶Casp

2、ase3、8、9及凋亡相關基因Bcl-2蛋白的表達。
　　結果：（1） MTT法檢測結果，蝙蝠葛活性成分對人肺癌A549細胞株有明顯的抑制生長的作用，且呈現(xiàn)出濃度的依賴性；（2）倒置顯微鏡觀察結果，實驗組腫瘤細胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)凝集，細胞間連接疏松，貼壁能力減弱；（3） HE染色觀察結果，實驗組腫瘤細胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)濃縮或染色質(zhì)塊形成，有的細胞膜起泡形成凋亡小體；（4）AO/EB熒光染色觀察結果，實驗組腫瘤細胞核

3、染色質(zhì)呈橘紅色，胞質(zhì)內(nèi)的橘紅色或橘黃色熒光消失，細胞周圍可見亮綠色的凋亡小體；（5）流式細胞儀檢測結果顯示：蝙蝠葛活性成分可以誘導A549細胞發(fā)生凋亡，加藥組出現(xiàn)亞二倍體峰，并且 GO/G1期細胞比例顯著增加（P﹤0.01），而S期和G2/M期細胞比例則明顯下降,將細胞阻滯在GO/G1期；（6）免疫細胞化學ki-67抗原檢測結果，蝙蝠葛活性成分作用后ki-67陽性表達率隨藥物濃度的提高和作用時間的延長而降低，表現(xiàn)出濃度的依賴性關系；凋亡

4、相關基因表達檢測結果，實驗組Bcl-2基因蛋白陽性表達率明顯降低，加藥組Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3表達增加，與對照組相比較均有顯著差異（P<0.01）。
　　結論：
　　1.蝙蝠葛活性成分在體外對人肺癌 A549細胞株有顯著的抑制增殖和誘導凋亡作用。
　　2.蝙蝠葛活性成分抑制增殖作用機制可能與下調(diào) ki-67蛋白表達,細胞周期發(fā)生G0/G1期阻滯有關。
　　3.蝙蝠葛活性成分誘導