TCF4對人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響.pdf

1、一.研究背景和目的:
　　皮膚鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)是一種皮膚惡性腫瘤,起源于表皮和皮膚附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞,目前病因仍不清楚。Wnt/β-catenin信號通路,即經(jīng)典的Wnt信號通路,在生物的結(jié)構(gòu)形成、細(xì)胞分化、形態(tài)發(fā)生和腫瘤進(jìn)展等方面起著重要作用。在發(fā)生腫瘤的機(jī)體中,β-聯(lián)蛋白(β-catenin)的代謝平衡紊亂,從而導(dǎo)致β-catenin在胞漿水平上升,進(jìn)而進(jìn)入細(xì)胞核,與核內(nèi)T

2、細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子/淋巴樣增強(qiáng)因子(T cell factor/lymphoid enhancer factor,TCF/LEF)結(jié)合,激活TCF/LEF下游基因轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致調(diào)控腫瘤生長、分化、侵潤的β-catenin/TCF信號通路的靶基因的調(diào)節(jié)改變,致使腫瘤發(fā)生的可能性增加。TCF/LEF屬于高遷移率組蛋白(High Mobility Group,HMG),具有高度保守的結(jié)構(gòu),是核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,其成員包括TCF-1、LEF1、TCF-3和TC

3、F-4。其中,TCF-4是近年研究證實的與腫瘤關(guān)系最為密切的轉(zhuǎn)錄因子。
　　近年研究報道,TCF4在肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、胃癌、肝癌等腫瘤發(fā)生過程中表達(dá)明顯增強(qiáng),而在這些腫瘤腫瘤發(fā)生過程中共同的早期事件是異常升高的 TCF4刺激下游靶基因表達(dá)。研究報道,作用于β-catenin/TCF的抑制劑,可以有效的控制腫瘤的形成、侵襲及轉(zhuǎn)移,目前在這一領(lǐng)域的研究具有非常廣闊的前景和深遠(yuǎn)的意義。本研究以皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株A431為研究對象,研

4、究TCF4對A431細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響,探索β-catenin/TCF通路在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的作用,闡明皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制,為尋找其新的治療靶點,改善患者的預(yù)后提供理論依據(jù)。
　　二、實驗方法和結(jié)果:
　　1、設(shè)置實驗分組:未轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染control siRNA組和轉(zhuǎn)染TCF4 siRNA組。
　　2、采用siRNA表達(dá)載體技術(shù),轉(zhuǎn)染control siRNA及si-TCF4 RNA至A431細(xì)胞株,提取總

5、RNA,供后續(xù)實驗用。
　　3、采用RT-PCR方法檢測轉(zhuǎn)染si-TCF4 RNA后,A431細(xì)胞株TCF4 mRNA表達(dá)的變化。
　　4、提取A431細(xì)胞株蛋白,免疫印跡法(Western blot)檢測轉(zhuǎn)染si-TCF4 RNA后A431細(xì)胞株TCF4蛋白的表達(dá)變化。
　　5、Transwell方法檢測轉(zhuǎn)染si-TCF4 RNA后,A431細(xì)胞株細(xì)胞的遷移和侵襲能力變化。
　　6、CCK-8方法檢測轉(zhuǎn)染si-

6、TCF4 RNA后,A431細(xì)胞株的增殖力變化。
　　7、流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染si-TCF4 RNA后,A431細(xì)胞株的細(xì)胞周期變化。
　　8、結(jié)果證實,與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染control siRNA組相比,轉(zhuǎn)染TCF4 siRNA有效地下調(diào)了A43l細(xì)胞株的TCF4 mRNA及蛋白的表達(dá)水平。TCF4受到抑制后,431細(xì)胞的遷移能力及侵襲能力明顯下降(p<0.05),細(xì)胞的生長增殖也受到抑制(p<0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周

7、期發(fā)現(xiàn),在皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中,TCF4 siRNA可阻滯細(xì)胞于G2/M期。
　　三、結(jié)論:
　　1、si-TCF4可抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞TCF4 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　2、TCF4可促進(jìn)皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株的增殖、遷移和侵襲。
　　3、抑制TCF4后,可抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株的生長。
　　通過以上實驗,為進(jìn)一步了解Wnt/β-catenin信號通路在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的調(diào)