MicroRNA-126在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)以及對(duì)細(xì)胞株786-O生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：研究人腎透明細(xì)胞癌與癌旁正常腎組織中miRNA-126的表達(dá)情況，分析miRNA-126的表達(dá)與腎癌病理分級(jí)、臨床分期之間存在的相關(guān)性。研究miRNA-126影響腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制。
　　方法：⑴通過(guò)real-time qPCR的方法檢測(cè)30例ccRCC及癌旁正常腎組織中miRNA-126的表達(dá)情況，研究miRNA-126表達(dá)與ccRCC患者的病理分級(jí)和臨床分期的關(guān)系。⑵運(yùn)用real-time qPCR的方法檢測(cè)腎癌細(xì)

2、胞株786-O和人腎小管上皮細(xì)胞株HK-2中miRNA-126的表達(dá)；應(yīng)用Lipofectamine RNAiMAX轉(zhuǎn)染has-mir-126-5p于腎癌細(xì)胞株786-O，上調(diào)其表達(dá)，實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)其表達(dá)情況，并通過(guò)MTT、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、Annexin V/PI雙染法分別觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞在增殖、侵襲力和凋亡方面的變化。
　　結(jié)果：①30例ccRCC組織和癌旁組織中，ccRCC組織中miRNA-126的相對(duì)表達(dá)量

3、明顯低于癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量，癌旁為癌組織表達(dá)倍數(shù)最大為15.49，最小為0.37，存在顯著差異（P<0.05）。30例ccRCC標(biāo)本根據(jù)病理分級(jí)進(jìn)行分組。miRNA-126在高分化組中表達(dá)的相對(duì)含量為36.63±5.38，中、低分化組為19.96±7.28，沒有顯著差異（P>0.05）。在不同臨床分期的樣本中，Ⅰ期miRNA-126表達(dá)的相對(duì)含量為37.05±6.38，Ⅱ-Ⅲ期miRNA-126表達(dá)的相對(duì)含量24.03±6.15，不

4、同分期之間沒有顯著差異（P>0.05）。②與腎癌細(xì)胞株786-O中miRNA-126的表達(dá)量相比，HK-2細(xì)胞株的表達(dá)量明顯較高。轉(zhuǎn)染786-O細(xì)胞株成功后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞miRNA-126的相對(duì)表達(dá)量為42.86±7.01，顯著高于陰性對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量27.46±8.43（P<0.05）。MTT法檢測(cè)人腎癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染后48小時(shí)增殖情況，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞相對(duì)存活率為80.82±0.47，陰性對(duì)照組98.87±0.27，存在顯著差異（P<0.0

5、1）。Transwell侵襲試驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的數(shù)目平均為33.89±2.80，陰性對(duì)照組為53.67±2.23。與陰性對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組明顯降低，存在顯著差異（P<0.05）。Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率為22.56±1.13，陰性對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率為7.20±0.26。與陰性對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率明顯增高,存在顯著差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：⑴miRNA-126-5p在

6、ccRCC中的表達(dá)量明顯低于癌旁正常腎組織中的表達(dá)，其表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌的腫瘤分級(jí)和臨床分期無(wú)明顯相關(guān)性。miRNA-126-5p在人腎癌細(xì)胞株786-O中的表達(dá)明顯低于人腎小管上皮細(xì)胞株HK-2中的表達(dá)。⑵has-miRNA-126-5p可以成功轉(zhuǎn)染人腎癌細(xì)胞株786-O；轉(zhuǎn)染后，miRNA-126-5p在786-O中的表達(dá)明顯上調(diào)。miRNA-126-5p在人腎癌細(xì)胞株786-O的高表達(dá)，能夠使786-O細(xì)胞增殖受到抑制，侵襲力降低