胰腺星狀細胞中Hic-5對胰腺癌細胞生物學行為的影響.pdf

1、目的：通過研究胰腺星狀細胞（pancreatic stellate cell，PSC）和胰腺癌細胞共培養(yǎng)體系中胰腺星狀細胞 Hic-5基因表達下調對胰腺癌細胞的生長增殖、凋亡、侵襲遷移等生物學行為能力的影響，為 Hic-5作為胰腺癌浸潤轉移的新興標志物的研究及基因靶向治療奠定初步的理論和實驗基礎。
　　方法：1.分別以0 pmol（A組）、6.25 pmol（B組）、12.5 pmol（C組）、25 pmol（D組）和50 pmo

2、l（E組）的siRNA沉默胰腺星狀細胞的Hic-5基因，轉染6小時后RT-PCR檢測各實驗組中胰腺星狀細胞的Hic-5mRNA表達，免疫熒光法檢測胰腺星狀細胞中Hic-5表達；Western blot檢測各實驗組胰腺星狀細胞中的Hic-5蛋白表達；2.分別以A組、B組、C組、D組和E組胰腺星狀細胞與相同的胰腺癌細胞a組、b組、c組、d組、e組行共培養(yǎng)48h；3.共培養(yǎng)結束后，采用細胞劃痕實驗和Transwell實驗檢測各組胰腺癌細胞侵襲

3、遷移能力變化；采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測各組胰腺癌細胞增殖率變化；采用流式細胞法檢測各組胰腺癌細胞凋亡率變化；采用免疫熒光法和 Western blot檢測各組胰腺星狀細胞中 MMP-9（matrix metalloproteinases-9，MMP-9）表達變化。
　　結果：1.Hic-5表達在胰腺星狀細胞的細胞質中，胰腺星狀細胞Hic-5 mRNA和Hic-5蛋白表達量隨Hic-5 siRN

4、A轉染濃度增大逐漸減少，與A組比較，C組、D組和E組減少明顯，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；各實驗組中胰腺星狀細胞Hic-5免疫熒光強度隨Hic-5 siRNA轉染濃度增大逐漸減少，與A組比較， D組和 E組減少明顯，其差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。2.隨著胰腺星狀細胞Hic-5 siRNA轉染濃度增大，與之對應的各組胰腺癌細胞相對遷移距離逐漸減小，與a組比較，d組和e組胰腺癌細胞相對遷移距離減小明顯，其差異具有統(tǒng)計學意義（

5、P<0.05）；各組胰腺癌細胞穿膜細胞數(shù)逐漸減少，與a組比較，c組、d組和e組胰腺癌細胞穿膜數(shù)量減少明顯，其差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；各組胰腺癌細胞凋亡率逐漸增大；各組胰腺癌細胞增殖率逐漸減小，與a組比較c組、d組和e組胰腺癌細胞增殖率有顯著減小，其差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05）；各組胰腺星狀細胞MMP-9蛋白表達量和熒光強度逐漸減少，與 A組比較，C組、D組和 E組細胞 MMP-9蛋白表達量和免疫熒光強度減少明顯，其差異