托瑞米芬影響內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞生物學行為及機制的研究.pdf

1、冠狀動脈疾病（CAD）是目前嚴重威脅人類身體的重大疾病之一，在病變部位置入藥物洗脫支架（DESs）是迄今最好的治療方法，可減少血管再狹窄的幾率，但再狹窄率（ISR）并沒有完全消除，因此，再狹窄的預防和治療成為心血管疾病研究領域中的熱點。如何實現(xiàn)快速內(nèi)皮化和抑制平滑肌過度增生是目前預防再狹窄面臨的兩大挑戰(zhàn)。本文通過體外細胞實驗，探究新一代抗腫瘤藥物托瑞米芬（TOR）對人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）和血管平滑肌細胞（VSMCs）的細胞生物

2、學行為的影響及其作用機制。本文主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　?、賂OR影響內(nèi)皮細胞生物學行為。研究表明TOR能抑制內(nèi)皮細胞增殖且隨著TOR濃度增大其抑制作用也逐漸加強；顯著促進了內(nèi)皮細胞的早期凋亡，晚期凋亡及細胞壞死；抑制內(nèi)皮細胞的分裂并將細胞阻滯在G0G1期；延遲了內(nèi)皮細胞的粘附時間卻并未影響其粘附總數(shù)；顯著抑制細胞的運動和遷移行為；≥7.5μM的TOR可以明顯地改變細胞的形態(tài)結(jié)構。
　?、赥OR影響內(nèi)皮細胞的機制。免疫熒光

3、和免疫印記雙重驗證的方法檢驗PCNA、P53及Rho/ROCK信號通路的關鍵蛋白的表達量。研究結(jié)果表明：TOR濃度愈高，PCNA的表達量明顯降低，暗示TOR抑制內(nèi)皮細胞增殖的作用就愈明顯；而P53的表達隨TOR濃度的增加而增加，說明TOR是通過促進P53的表達而加速細胞的凋亡；TOR顯著抑制了整合素Integrinβ1及Rho的表達，進而降低了ROCK信號通路中下游因子MLC和pMLC的表達水平。說明TOR可能是通過Integrinβ1

4、-Rho-ROCK-(p)MLC信號通路抑制內(nèi)皮細胞的遷移行為。
　?、跿OR影響平滑肌細胞生物學行為。研究表明該藥物也能抑制平滑肌細胞增殖且隨著濃度增大抑制作用逐漸增強；顯著促進了平滑肌細胞的早期凋亡，晚期凋亡及細胞壞死；抑制平滑肌細胞的分裂并將細胞阻滯在G0G1期；延遲了平滑肌細胞的粘附時間并影響其粘附總數(shù)；顯著抑制平滑肌細胞群體的運動和遷移行為；高濃度的TOR可以明顯改變細胞的形態(tài)結(jié)構。
　　④TOR影響平滑肌細胞的機

5、制。采用免疫熒光和免疫印記雙重驗證的方法分別對PCNA，P53及Rho/ROCK信號通路中的關鍵蛋白的表達量進行分析，并運用流式細胞術對TOR影響平滑肌細胞的調(diào)亡行為作進一步的探討。結(jié)果表明：隨著TOR濃度增高，PCNA表達量明顯降低，抑制平滑肌細胞增殖的作用就愈明顯；而P53的表達隨TOR濃度的增加而增加，說明TOR是通過促進P53的表達而加速細胞的凋亡；高濃度TOR促進了平滑肌線粒體膜電位下降進而使釋放的活性氧水平升高，激活casp