不同條件下小鼠子宮內(nèi)膜雌激素受體及HOXA10基因表達的研究.pdf

1、在正常生殖發(fā)育過程中,胚胎著床是決定妊娠成功的關鍵。而胚胎著床是一個復雜的生理過程,它取決于容受狀態(tài)的子宮內(nèi)膜和具有侵入性胚胎的同步發(fā)育。子宮內(nèi)膜容受性變化在胚胎著床過程中起到關鍵性作用。其中,雌激素受體(Estrogen Receptor,ER)和HOXA-10基因在調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性方面起到重要作用。雌激素通過其受體調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的容受性,HOXA-10基因在生殖與胚胎著床、發(fā)育等方面有重要作用。與自然妊娠相比,體外受精-胚胎移植(I

2、VF-ET)過程中存在多種因素的影響,同時,子宮內(nèi)膜容受性在形成過程中受多種細胞因子、蛋白分子和基因的調(diào)控,這些特定調(diào)控因子在子宮內(nèi)膜發(fā)育分化過程中呈現(xiàn)較為顯著的時空表達特征,對內(nèi)膜容受性形成有重要作用。
　　本研究從ER分布的角度,利用免疫組化法檢測了不同條件處理的小鼠雌激素受體在小鼠發(fā)情周期子宮內(nèi)膜中的表達規(guī)律,探討不同時期ER受體在小鼠子宮內(nèi)膜上的分布表達是否存在有差異,結(jié)合分析ER的相應分布與胚胎在子宮著床的窗口期是否一致

3、,探討ER對小鼠子宮窗口期著床和子宮內(nèi)膜容受性變化的調(diào)節(jié)作用。同時,采用實時熒光定量 PCR(Real-time qPCR, RT-qPCR)法分別檢測不同處理條件下各組小鼠子宮內(nèi)膜上HOXA-10基因表達,觀察在人工注射超排激素、有無胚胎存在等因素下對HOXA-10基因表達的影響,進而探討這些因素對子宮內(nèi)膜容受性的作用。為探討雌激素對小鼠子宮容受性的影響,實現(xiàn)主動干預子宮內(nèi)膜容受性、提高IVF-ET的成功率。本研究利用免疫組織化學法檢

4、測了ER在小鼠發(fā)情周期子宮內(nèi)膜中的表達規(guī)律。將36只同日齡雌鼠,根據(jù)處理方式的不同隨機分為3組:自然發(fā)情受孕組、自然發(fā)情假孕組(對照組)和超數(shù)排卵組,3組小鼠在見栓后第2、4、6、8天分別取子宮樣,采用免疫組織化學法,對不同處理組小鼠子宮內(nèi)膜雌激素受體不同時期的表達進行定位和半定量研究,觀察小鼠子宮內(nèi)膜中ER的分布變化情況。免疫組化法檢測結(jié)果顯示,自然發(fā)情受孕組、自然發(fā)情假孕組(對照組)和超數(shù)排卵組小鼠在見栓后第2天,子宮內(nèi)膜上ER表達

5、量3組之間差異不顯著(P>0.05);之后的第4、6、8天,超數(shù)排卵組雌激素受體表達量顯著高于其他2組(P<0.05);自然發(fā)情受孕組小鼠子宮內(nèi)膜中ER的表達在第4、6天時顯著高于自然發(fā)情假孕組(P<0.05),在第8天時,自然發(fā)情受孕組小鼠子宮內(nèi)膜中的ER陽性率與自然發(fā)情假孕組差異不顯著(P>0.05)。與自然發(fā)情受孕組相比,自然發(fā)情假孕組和超數(shù)排卵組小鼠子宮內(nèi)膜容受性下降,窗口期開放延遲,而自然發(fā)情假孕組和超數(shù)排卵組差異不明顯(P>

6、0.05)。
　　本文通過測定在自然發(fā)情受孕組和超數(shù)排卵組中小鼠子宮HOXA-10基因表達量的不同,探討在人工注射超排激素、有無胚胎存在等因素下對HOXA-10基因表達的影響。將生長發(fā)育均勻、一致性較好的實驗小鼠隨機分成3組:自然發(fā)情受孕組、自然發(fā)情假孕組(對照組)和超數(shù)排卵組,3組小鼠在見栓后第2、4、6、8天分別取其子宮樣,采用SYBR Green I RT-qPCR檢測方法,分別對3組不同處理條件下小鼠子宮內(nèi)膜上HOXA-1

7、0基因表達量的變化情況進行檢測,并進行兩組間的比較分析。熒光定量PCR法檢測結(jié)果顯示,HOXA-10基因在超數(shù)排卵組和妊娠組小鼠的子宮內(nèi)膜上均有表達,但兩組在表達時間和表達量上存在差異。自然發(fā)情受孕組和超數(shù)排卵組的小鼠,在發(fā)情周期子宮內(nèi)膜HOXA-10基因表達均呈陽性,在妊娠第2天以后表達強度呈現(xiàn)增加趨勢,第6天以后逐漸下降;與自然發(fā)情假孕組小鼠比較,自然發(fā)情受孕組和超數(shù)排卵組小鼠子宮內(nèi)膜HOXA-10基因表達強度均有所增加,但增加幅度