HOXA10基因啟動子區(qū)甲基化及蛋白表達與子宮內膜異位癥關系的研究.pdf

1、目的：通過檢測子宮內膜異位癥（EMs）患者在位、異位內膜組織中HOXA10基因啟動子區(qū)甲基化狀況及HOXA10 蛋白表達水平，探討HOXA10 基因甲基化和蛋白表達與子宮內膜異位癥發(fā)生、發(fā)展的關系，并為HOXA10 作為靶點進行子宮內膜異位癥基因治療提供理論依據和實驗基礎。
　　 方法：研究對象為36 例EMs 患者的異位內膜、在位子宮內膜組織，并以15例無EMs 的正常子宮內膜作為對照組，采用北京天根生化技術有限公司的基因組D

2、NA 提取試劑盒（TIANamp Genomic DNA Kit）提取組織DNA，并對組織DNA進行亞硫酸氫鹽修飾、純化后作為模板，應用甲基化特異性聚合酶鏈反應法（MSP) 檢測HOXA10 基因啟動子區(qū)甲基化狀況，采用免疫組織化學染色法(SP 法)檢測EMs 中異位內膜、在位內膜組織及對照組標本中HOXA10 蛋白表達情況。實驗結果采用SPSS16.0 統(tǒng)計軟件處理，基因頻率采用直接計數(shù)法，各組間率的比較采用χ2 檢驗和Fisher′

3、s 精確概率法和非參數(shù)秩合檢驗. 基因蛋白表達與甲基化之間的相關性采用Spearman 等級相關分析，檢驗顯著性標準取α=0.05，P≤0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 ⑴36例EMs患者的異位內膜組織中HOXA10基因啟動子區(qū)CpG島甲基化率為33.3％(12/36)；其相應的在位內膜甲基化率為19.4％(7/36)；15例對照組子宮內膜組織中HOXA10基因均未發(fā)生甲基化；三組比較差異有統(tǒng)計學意義；

4、
　　 ⑵HOXA10在三組內膜的腺上皮和間質細胞中均有表達，對照組子宮內膜表達強度隨月經周期存在時空的特異性，分泌中、晚期明顯高于增生期和分泌早期；而EMs患者在位內膜、異位內膜中HOXA10蛋白表達下降，無明顯的分泌中、晚期峰，異位內膜間質細胞HOXA10的表達下降明顯，差異有統(tǒng)計學意義；
　　 ⑶12例異位內膜組織中HOXA10基因啟動子發(fā)生異常甲基化均發(fā)生在臨床III～IV期患者，臨床I～II期未發(fā)生甲基化；HO

5、XA10在I～IV期異位內膜組表達有差異，組間比較IV期低于I期、II期和III期，而其在位內膜HOXA10表達水平在I～IV期患者之間差異無統(tǒng)計學意義；
　　 ⑷異位內膜組織HOXA10的蛋白表達與HOXA10基因啟動子甲基化具有負相關性。
　　 結論： EMs 患者異位內膜組織中存在HOXA10 基因啟動子區(qū)異常甲基化，其基因表達普遍下調或缺失，且與EMs 的臨床分期相關。提示HOXA10 基因啟動子甲基化在EMs