新型雙功能銪螯合物在時(shí)間分辨熒光免疫分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、近年來分析生物化學(xué)及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域一直致力于研發(fā)操作簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)的量化分析及檢測方法。其中時(shí)間分辨熒光免疫法(TRFIA)近年來發(fā)展得十分迅速,它具備靈敏度高,便于自動(dòng)化操作,不易受基體干擾,可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)多標(biāo)記等優(yōu)點(diǎn),這些優(yōu)勢使其在眾多免疫方法中逐漸占據(jù)重要地位。與傳統(tǒng)的熒光素標(biāo)記不同,TRFIA充分利用了稀土元素配合物這類熒光物質(zhì)熒光壽命長及Stokes位移大的特點(diǎn),有效地克服短壽命的背景熒光對測定的干擾,使非特異性本底信號降低

2、到可以忽略的程度,達(dá)到了很高的信噪比。其中固相TRFIA是新一代的TRFIA方法,它克服了原來的液相TRFIA需要增強(qiáng)液、易受環(huán)境Eu3+污染等缺點(diǎn),簡化了測量步驟,提高了測量靈敏度。
　　 在此次研究中,作者首先運(yùn)用一種新型雙功能螯合物Eu(TTA)3(5-NH2-phen)(ETNP)用來標(biāo)記羊抗人IgG建立了一種新的固相雙抗體夾心免疫法。這種新型的螯合物具備強(qiáng)熒光、長壽命等特點(diǎn),與羊抗人IgG結(jié)合后不易解離,可直接在固相玻

3、片上檢測到較強(qiáng)的熒光信號。固相雙抗體夾心法操作簡單,其最終復(fù)合物可直接在玻片上進(jìn)行檢測。由熒光儀檢測得出的熒光信號強(qiáng)度與抗原濃度成正比,因此也可以運(yùn)用此方法作為定量分析的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)證明,運(yùn)用ETNP作為標(biāo)記物而建立起來的固相熒光免疫方法最低可檢測到5μg/L,而RIA最低檢測限僅為800～1000μ g/L,ELISA最低只能檢測到200μ g/L。這是該新型熒光標(biāo)記物ETNP第一次運(yùn)用于固相時(shí)間分辨熒光免疫分析方法中抗原抗體的定性定量