新型納米稀土?xí)r間分辨熒光探針的制備與應(yīng)用.pdf

1、稀土熒光探針具有熒光壽命長、Stokes位移大、發(fā)射峰尖銳等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)合時(shí)間分辨熒光測定技術(shù)可有效去除背景熒光的干擾，在復(fù)雜生物及環(huán)境樣品的測定中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。近年，時(shí)間分辨熒光生物顯微成像技術(shù)的快速發(fā)展又為稀土熒光生物探針的發(fā)展與應(yīng)用提供了新的機(jī)遇。在本博士學(xué)位論文的研究中，利用稀土熒光配合物作為發(fā)光基團(tuán)，制備了數(shù)種新型的納米稀土熒光生物探針，并考察了其在時(shí)間分辨熒光生化分析中的應(yīng)用性能。
　　將β-二酮-銪(Ⅲ)熒光配合物

2、2，6-BHHD-Eu3+-BPT與硅烷化試劑IPTES共價(jià)偶聯(lián)，利用反相微乳液聚合法制備了一種新型的可見光激發(fā)納米硅膠-銪熒光微粒。這種納米微粒呈現(xiàn)規(guī)則的球形，具有均一的尺寸（42±3nm）和較長的熒光壽命(346μs)，其激發(fā)波長能夠從紫外光區(qū)延伸到475 nm。將其用于鏈霉親和素標(biāo)記后，成功實(shí)現(xiàn)了復(fù)雜水樣品中鼠隱孢子蟲和小隱孢子蟲卵囊的時(shí)間分辨熒光免疫成像測定。
　　合成了一種可見光激發(fā)的銪(Ⅲ)熒光配合物BHHBB-Eu3

3、+-BPT，并利用去核鐵蛋白的解離-重組結(jié)構(gòu)特性制備了一種去核鐵蛋白包裹銪(Ⅲ)配合物的熒光蛋白Eu@AFt。該蛋白激發(fā)峰波長達(dá)420 nm，且具有長的熒光壽命（365μs）和優(yōu)良的生物親和性，可直接用于活體細(xì)胞的時(shí)間分辨熒光成像。將該蛋白用線粒體靶向定位基團(tuán)SPTPP修飾后制備了一種具有線粒體靶向定位作用的熒光蛋白Eu@AFt-SPTPP，并實(shí)現(xiàn)了HeLa細(xì)胞中線粒體的共聚焦熒光顯微鏡靶向定位成像。
　　利用去核鐵蛋白的結(jié)構(gòu)特性

4、，通過在該蛋白內(nèi)包裹鋱(Ⅲ)熒光配合物PTTA-Tb3+，并在其表面修飾對NO具有特異性響應(yīng)的羅丹明衍生物分子，制備了一種基于鋱(Ⅲ)配合物-羅丹明熒光共振能量轉(zhuǎn)移機(jī)理的對NO具有特異性響應(yīng)的比率型納米熒光探針Tb@AFt-Rh。該探針具有熒光壽命長、Stokes位移大、選擇性和靈敏度高、生物相容性好及可用于比率型熒光檢測等優(yōu)點(diǎn)，被成功用于HepG2細(xì)胞及大型蚤內(nèi)NO的時(shí)間分辨熒光成像測定。
　　將銪(Ⅲ)熒光配合物PTTA-Eu