水牛乳乳清蛋白抗氧化肽的分離純化及產(chǎn)品開發(fā).pdf

1、水牛乳被譽(yù)為“奶中之王”,其蛋白種類和人類必需氨基酸種類含量豐富,并且水牛乳抗氧化活性肽的研究重點還停留在制備工藝上,含有抗氧化活性肽的水牛乳制品還沒有。為提高水牛乳產(chǎn)品附加值,本文研究開發(fā)具有抗氧化活性的水牛乳飲料并研究其中乳清蛋白抗氧化肽的純化。
　　對前期研究所選中的中性蛋白酶進(jìn)行固定,比較瓊脂、海藻酸鈉和殼聚糖等3種載體在其最適條件下固定中性蛋白酶的酶活力回收率,最高為瓊脂,其酶活力回收率達(dá)到37.80％,而海藻酸鈉固定中

2、性蛋白酶的酶活力回收率最高為19.89%,殼聚糖固定化酶活力回收率最高僅為16.74%,得出瓊脂為最佳固定化載體,其最優(yōu)固定化條件為瓊脂濃度3%,每克瓊脂載體添加160mg中性蛋白酶、最佳固定化時間為4h。通過比較游離酶和固定化酶的相對活力,發(fā)現(xiàn)固定化酶的酸堿穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、儲存穩(wěn)定性和操作穩(wěn)定性等理化性質(zhì)均比游離酶高,且固定化酶循環(huán)使用經(jīng)過10次后,活力保持了原來的50%以上。
　　利用前面制備的固定化酶對脫脂水牛乳進(jìn)行酶解,

3、最佳酶解工藝為pH7.5、溫度55℃、加酶量為2000 U/g和酶解5h。驗證實驗表明,在最佳工藝條件下,水解產(chǎn)物的DPPH自由基清除率達(dá)到65.24%。然后將酶解液稀釋成抗氧化活性肽含量為50ug/mL的母液進(jìn)行調(diào)配,生產(chǎn)抗氧化活性乳飲料,最佳配方為水牛乳:酶解液=3:1,白砂糖3%(w/v),β-環(huán)糊精0.3%(w/v),咖啡2%(w/v)。
　　通過使用10000 Da和5000 Da卷式膜對水牛乳乳清蛋白酶解物進(jìn)行超濾分級

4、,得到最佳超濾壓力為0.20 MPa。超濾后得到了3個組分,其中抗氧化活性最高的是分子量小于5000Da的組分,其DPPH自由基清除率達(dá)到60.18%。利用DA201-C大孔吸附樹脂對分子量小于5000Da的乳清蛋白酶解物組分進(jìn)行脫鹽,得到最優(yōu)脫鹽條件為每100mL樣品上樣1h,然后用70%乙醇以50ml/h流速洗脫6小時。DA201-C大孔吸附樹脂按最優(yōu)條件對水牛乳乳清蛋白抗氧化活性肽進(jìn)行脫鹽,最終測得脫鹽率達(dá)到97.33%,多肽回收

5、率達(dá)到80.10%。再通過葡聚糖凝膠 G-15柱層析對經(jīng)過脫鹽處理的水牛乳乳清蛋白酶解物進(jìn)行分離,得到最優(yōu)分離條件為測量波長280nm,上樣量為200ug,洗脫流速為4mL/12.5min。葡聚糖凝膠G-15色譜在最優(yōu)條件下對水牛乳乳清蛋白酶解物脫鹽樣品進(jìn)行分離純化,收集濃縮出現(xiàn)的4個峰,分別測定其DPPH自由基清除率,發(fā)現(xiàn)峰F2抗氧化活性最強(qiáng),峰F1抗氧化活性次之,但其含量較多。最后利用反相高效液相色譜對葡聚糖凝膠G-15色譜分離出的