雞胚抗氧化蛋白的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、雞胚蛋作為一種民間傳統(tǒng)食補珍品在清朝成豐年間就有食用的習(xí)慣，其營養(yǎng)豐富，效用價值高，是營養(yǎng)、進補治病的佳品。隨著人們對健康的重視，對食源性抗氧化劑的研制越來越受到重視。雞胚蛋白是雞胚中一種重要的活性物質(zhì)，它不僅是雞胚生命活動的重要物質(zhì)，而且具有獨特的抗皺抗氧化功能，因而對雞胚蛋白中具有抗氧化作用的蛋白進行分離純化就有重要的意義。 本文以孵化15 d的雞胚蛋為原料，采用乙醚低溫回流脫去雞胚干粉中脂肪，緩沖液法提取雞胚蛋中的蛋白，在

2、單因素的基礎(chǔ)上，選取料液比、提取溫度、提取時間，應(yīng)用Box-Behnken中心組合實驗設(shè)計建立數(shù)學(xué)模型，以蛋白提取率為指標，確定雞胚蛋白最佳提取條件，再通過離子交換色譜法、葡聚糖G-100凝膠過濾層析法對雞胚蛋白中抗氧化能力較強的蛋白進行分離純化，最后通過動物體內(nèi)實驗驗證抗氧化蛋白的活性。
　　首先通過差示掃描量熱儀(DSC)確定粗蛋白的變性起始溫度。在單因素的基礎(chǔ)上，選取料液比、提取溫度、提取時間，應(yīng)用Box-Behnken中心

3、組合實驗設(shè)計建立數(shù)學(xué)模型，以蛋白提取率為指標，得出最佳提取條件為料液比1∶16、溫度為50℃、時間116 min，在預(yù)測優(yōu)化條件下進行3次驗證實驗，得到雞胚蛋白提取率為73.87％。
　　再次，對雞胚蛋白進行分離純化。在最佳條件下提取的雞胚蛋白通過DEAE-纖維素-52陰離子交換色譜法分離出四個組分:命名為P1;P2;P3;P4。采用二苯代苦味?；?DPPH·)、超氧陰離子(O2-·)、羥自由基(·OH)進行體外抗氧化蛋白活性實驗

4、，評價各個組分抗氧化活性。將抗氧化性較高的組分采用葡聚糖G-100凝膠過濾層析法對分離組分進一步純化，得到雞胚抗氧化蛋白P4-1組分。LC-MS檢測分析得到抗氧化蛋白P4-1中包含386個氨基酸，等電點為5.07。SDS-PAGE電泳觀察P4-1分子量為45.0 kDa。通過氨基酸組成的測定，P4-1中氨基酸種類齊全，富含17種氨基酸（色氨酸在鹽酸水解時被破壞未檢出），7種必需氨基酸。通過差示掃描量熱儀(DSC)分析得到P4-1變性溫度

5、在46.59-67.00℃之間，熔點為57.16℃，熱焓(△H)為0.9183 J/g。
　　最后考察溫度、pH、NaCl、金屬離子對抗氧化蛋白活性的影響并研究了抗氧化蛋白在小鼠體內(nèi)的體內(nèi)活性。結(jié)果表明溫度在30-50℃之間時，P4-1清除羥自由基(·OH)的能力較穩(wěn)定，而隨著溫度的升高，P4-1清除羥自由基(·OH)的能力開始下降，最后再次趨于平穩(wěn)。P4-1清除羥自由基(·OH)的能力隨著pH值的增加而減小，NaCl濃度在0-4