胚胎蛋源性抗氧化肽的制備、分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、人體新陳代謝過程中會(huì)產(chǎn)生一些活性氧和其他自由基產(chǎn)物,這些物質(zhì)的過量積累會(huì)對(duì) DNA、蛋白質(zhì)等生物大分子產(chǎn)生氧化性損傷,對(duì)人體健康產(chǎn)生危害,因此,有必要開發(fā)一些外源性抗氧化劑清除這些活性氧和自由基。抗氧化肽是人們從動(dòng)、植物蛋白以及微生物發(fā)酵產(chǎn)物中提取或制備的生物活性肽,其具有活性強(qiáng)、分子質(zhì)量小、易吸收,天然安全等特點(diǎn),已成為生物領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。
　　受精蛋在特定的溫度下能夠進(jìn)行胚胎發(fā)育,且胚胎處于高濃度的氧環(huán)境中而不受氧化性損傷

2、,這種生物學(xué)現(xiàn)象表明胚胎蛋中有一些抗氧化性物質(zhì)能夠保護(hù)胚胎的正常發(fā)育;孵化期間,胚胎蛋中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化為胚胎可吸收的營養(yǎng)物質(zhì),必首先降解為低分子量的肽或氨基酸;這些均為從胚胎蛋中制備抗氧化活性肽提供了有利條件,但目前國內(nèi)外利用胚胎蛋制備抗氧化肽的報(bào)道很少。
　　本研究是利用三黃雞受精蛋為原料,研究了受精蛋蛋清在孵化期間的理化性質(zhì)和抗氧化規(guī)律,結(jié)果表明水分、脂肪、蛋清 pH值在孵化期間呈下降趨勢(shì);灰分、蛋白質(zhì)呈上升趨勢(shì);多肽含量呈先升

3、后降的趨勢(shì),且在孵化的第6d多肽含量達(dá)到峰值,6.61mg/g。蛋清中的水溶性蛋白(肽)具有較強(qiáng)的抗氧化活性,其對(duì) DPPH?和?OH清除能力和總抗氧化能力隨著孵化時(shí)間的延長而增強(qiáng),并且與樣品濃度成正相關(guān),6th的總抗氧化能力隨樣品濃度增大而增強(qiáng)的速率最快。
　　采用不同的蛋白酶酶解孵化6d的胚胎蛋蛋清,以酶解產(chǎn)物的 DPPH?清除率為指標(biāo),篩選出酶解胚胎蛋蛋清制備抗氧化肽的最佳酶源為堿性蛋白酶,通過Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)

4、和響應(yīng)面(RSM)分析法優(yōu)化酶解胚胎蛋蛋清制備抗氧化肽的最佳工藝條件:溫度46℃、pH9.1、底物質(zhì)量濃度4.28％、加酶量21000U/g,在此條件下所得酶解產(chǎn)物的 DPPH?清除率活性最強(qiáng),達(dá)到84.97%。
　　利用小型切向流超濾系統(tǒng),選用截留分子量分別為30kD、10kD、5kD的超濾膜,將孵化6d胚胎蛋蛋清的酶解樣品分離成>30kD(MWCOⅠ)、30~10kD(MWCOⅡ)、10~5kD(MWCOⅢ)、<5 kD(MW

5、COⅣ)4部分,采用不同的抗氧化體系,測(cè)定了酶解樣品、MWCOⅠ、MWCOⅡ、MWCOⅢ、MWCOⅣ的抗氧化活性變化。組分 MWCOⅠ的 DPPH?清除率最強(qiáng),30mg/mL清除率達(dá)83.94%;羥基自由基清除率、超氧陰離子的清除能力、總抗氧化能力和還原能力均是組分 MWCOⅣ最強(qiáng),在10mg/mL時(shí),羥基自由基清除率達(dá)47.91%,超氧陰離子的清除能力達(dá)69.23%,在695nm和700nm下的吸光度分別為0.136和0.537。結(jié)果