抗水牛乳β-乳球蛋白多克隆抗體的制備與應(yīng)用.pdf

1、牛乳中β-乳球蛋白是一種主要的過敏原，大約有60％牛乳過敏人群對(duì)β-乳球蛋白過敏。牛乳β-乳球蛋白與水牛乳β-乳球蛋白存在免疫交叉反應(yīng)，對(duì)牛乳β-乳球蛋白過敏的人群也可能對(duì)水牛乳β-乳球蛋白過敏。因此，從食物過敏的角度探索水牛乳β-乳球蛋白具有一定理論價(jià)值。另外，由于水牛乳消費(fèi)人群逐漸增加，為了保護(hù)過敏患者的健康，開展水牛乳的過敏研究將具有重要現(xiàn)實(shí)意義。 本研究的主要內(nèi)容包括水牛乳β-乳球蛋白的分離純化、兔抗水牛乳β-乳球蛋白多

2、克隆抗體的制備以及水牛乳β-乳球蛋白間接競爭ELISA檢測方法的建立。 在水牛乳β-乳球蛋白的分離純化過程中，建立了DEAE-Sepharose FastFlow離子交換結(jié)合Sephadex G-75凝膠層析分離純化水牛乳β-乳球蛋白的方法。SDS-PAGE和IEF-PAGE鑒定結(jié)果表明，兩種方法結(jié)合可以分離得到純度>90％的水牛乳β-乳球蛋白。 在抗水牛乳β-乳球蛋白多克隆抗體的制備過程中，建立了間接ELISA檢測水牛

3、乳β-乳球蛋白抗血清效價(jià)的檢測方法及制備抗水牛乳β-乳球蛋白多克隆抗體的程序。免疫2只日本大白兔分別獲得了間接ELISA檢測效價(jià)高達(dá)1:204800和1:102400及雙向瓊脂擴(kuò)散檢測效價(jià)均為1:16的抗血清。通過雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)證實(shí)了水牛乳β-乳球蛋白與牛乳β-乳球蛋白存在免疫交叉反應(yīng)。 建立了檢測水牛乳β-乳球蛋白的間接競爭ELISA方法，確定的工作條件如下：包被抗原濃度2.5μg/mL，抗體稀釋倍數(shù)為1:60000；二抗稀