植物內(nèi)生菌發(fā)酵大豆的工藝及發(fā)酵大豆體外評(píng)價(jià)體系的建立.pdf

1、納豆(natto)營(yíng)養(yǎng)成分豐富，主要包括納豆激酶、納豆菌、卵磷脂、超氧化物歧化酶(SOD)、皂甙、生物多糖以及異黃酮類物質(zhì)等，納豆主要功效包括溶血栓、抗衰老、胃腸調(diào)節(jié)和抗癌等。
　　本實(shí)驗(yàn)室曾從黃豆、黑豆、綠豆以及紫花苜蓿的種子或豆芽中分離出不同種類的植物內(nèi)生菌，通過(guò)秀麗隱桿線蟲(chóng)喂食實(shí)驗(yàn)，篩選出了在自然條件下能使野生型秀麗隱桿線蟲(chóng)延壽的不同植物內(nèi)生細(xì)菌。本研究在此基礎(chǔ)上，嘗試?yán)帽緦?shí)驗(yàn)室分離保藏的能使線蟲(chóng)延壽的植物內(nèi)生細(xì)菌發(fā)酵蒸熟

2、的大豆，并對(duì)發(fā)酵大豆工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。此外，對(duì)目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上銷售的主要納豆品種展開(kāi)調(diào)研，發(fā)現(xiàn)目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)主要銷售日本本場(chǎng)水戶納豆、燕京納豆和青島壽納豆，其中后兩者為國(guó)產(chǎn)納豆品種。分別購(gòu)買了上述三種商品納豆，并從購(gòu)買的商品納豆中分別分離出三種納豆菌，將分自日本本場(chǎng)水戶納豆、燕京納豆和青島壽納豆中的納豆菌分別命名為菌株SH、菌株YJ和菌株QDS。通過(guò)16S rDNA序列和相關(guān)生理生化指標(biāo)測(cè)定，最終將發(fā)現(xiàn)菌株SH、YJ和QDS分別鑒定為枯草芽

3、孢桿菌。
　　以分離得到的商品納豆中的枯草芽孢桿菌為對(duì)照，采用專一性性較好的瓊脂糖—纖維平法對(duì)發(fā)酵大豆中的納豆激酶進(jìn)行初篩，最終從對(duì)秀麗隱桿線蟲(chóng)有延壽作用的植物內(nèi)生菌中挑選出三株產(chǎn)納豆激酶較高的大豆內(nèi)生菌，進(jìn)行大豆發(fā)酵工藝優(yōu)化和灌喂小鼠實(shí)驗(yàn)，挑選出的三株菌株分別為來(lái)自黑豆的Gb4、Gb5和來(lái)自黃豆種子的SSd14。通過(guò)菌株在豆粉浸液培養(yǎng)基中生長(zhǎng)及培養(yǎng)基添加不同碳源的菌株生長(zhǎng)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)添加葡萄糖對(duì)菌株生長(zhǎng)有明顯促進(jìn)作用，因而，在

4、發(fā)酵大豆前往蒸熟的大豆中加入適量葡萄糖拌勻，以改善大豆的發(fā)酵效果。對(duì)工藝優(yōu)化后的發(fā)酵大豆中的納豆激酶，采用靈敏度較高的酪蛋白水解法進(jìn)行定量測(cè)定，發(fā)現(xiàn)用Gb4、Gb5和SSd14發(fā)酵大豆每毫升粗酶液中的納豆激酶分別為304U、261U和160U。通過(guò)二苯代苦味?；杂苫?DPPH)體外清除實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用Gb4、Gb5和SSd14發(fā)酵的大豆在反應(yīng)72h后，對(duì)DPPH自由基的平均清除率分別為65.92、72.84％和59.59％。通過(guò)高效液相檢

5、測(cè)發(fā)現(xiàn)，菌株Gb4、Gb5和SSd14均能分泌葡萄糖苷酶，能將未發(fā)酵大豆中的大豆異黃酮糖苷脫去葡萄糖轉(zhuǎn)化為游離型大豆異黃酮苷元，這種游離型大豆異黃酮苷元進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體后更有利于動(dòng)物的吸收與利用。
　　此外，本研究還對(duì)發(fā)酵大豆所用菌株分別進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)和胃腸運(yùn)轉(zhuǎn)耐受實(shí)驗(yàn)，研究結(jié)果表明，菌株Gb4、Gb5和SSd14對(duì)沙門氏菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均無(wú)明顯抑制作用。另外，這三株發(fā)酵大豆用菌株均具有較強(qiáng)的耐受人工胃液和人工腸液能力。值得