混菌發(fā)酵豆粕制備大豆肽的研究.pdf

1、大豆肽是大豆蛋白經(jīng)水解得到的低分子肽混合物，具有比大豆蛋白更優(yōu)越的理化特性和生理功能，在食品、醫(yī)藥和飼料添加劑中具有廣泛的應(yīng)用前景。微生物發(fā)酵是制備大豆肽的方法之一，由于其將蛋白酶的發(fā)酵生產(chǎn)和大豆肽的酶解生產(chǎn)有機(jī)地結(jié)合在一起，降低了大豆肽的生產(chǎn)成本，同時(shí)克服了酶水解法制備大豆肽產(chǎn)品的苦味大和口感差等缺點(diǎn)。目前利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)大豆肽被認(rèn)為是一種較先進(jìn)和有效的方法，應(yīng)用前景較好。 本論文以工業(yè)副產(chǎn)物豆粕為原料，利用微生物混合發(fā)酵

2、技術(shù)來(lái)制備大豆肽，以期獲得具有肽營(yíng)養(yǎng)和益生特性的飼料添加劑。本試驗(yàn)通過(guò)篩選產(chǎn)蛋白酶活性較高的芽孢桿菌，在體外研究其益生特性，并與米曲霉進(jìn)行配伍篩選能混合發(fā)酵豆粕制備大豆肽的菌株組合，利用正交試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法分別對(duì)混菌發(fā)酵條件和發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，為大豆肽的工業(yè)擴(kuò)大生產(chǎn)提供了參考。結(jié)果如下： （1）產(chǎn)蛋白酶芽孢桿菌的篩選：試驗(yàn)以蛋白酶活力和水解度為指標(biāo)，結(jié)合液體發(fā)酵和固體發(fā)酵工藝考察菌株的發(fā)酵能力，從而篩選優(yōu)良的豆粕發(fā)酵菌株。結(jié)

3、果表明，通過(guò)初篩和復(fù)篩獲得3株能較好發(fā)酵豆粕的芽孢桿菌CS16、CS21、CS27，為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。 （2）芽孢桿菌益生特性的體外研究：模擬胃腸道環(huán)境，研究3株芽孢桿菌的耐受存活情況，同時(shí)對(duì)腸道中致病性金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、腸炎沙門(mén)氏菌拮抗特性、產(chǎn)酶特性和急性毒性安全性試驗(yàn)進(jìn)行研究。表明在4h內(nèi)，人工胃液中存活率在15％～50％之間，膽鹽和人工腸液中存活率在50％以上；對(duì)病原菌抑菌圈直徑在10㎜以上；具有較好的蛋白酶和

4、淀粉酶活性；急性毒性試驗(yàn)LD50>20g/㎏BW，表明這3株芽孢桿菌可以作為飼用微生態(tài)制劑的候選菌種。 （3）混菌發(fā)酵豆粕菌株的篩選及鑒定：利用平板混合培養(yǎng)和實(shí)際發(fā)酵相結(jié)合的方法篩選發(fā)酵豆粕的最佳菌株組合，并對(duì)篩選的芽孢桿菌進(jìn)行鑒定。結(jié)果獲得能和米曲霉配伍的芽孢桿菌CS27，經(jīng)鑒定CS27為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。 （4）混菌發(fā)酵制備大豆肽的發(fā)酵工藝研究：利用正交試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法分別對(duì)混菌發(fā)