6,7,4＇-三羥基異黃酮衍生物合成修飾及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、多羥基異黃酮類化合物具有良好的生物利用價值，大部分可從豆類植物中萃取獲得，但含量極少。6，7，4'-三羥基異黃酮(T2)屬于多羥基異黃酮化合物，雖市面上有售，但大多價格昂貴并且缺乏高質(zhì)量的合成、純化技術(shù)。鑒于此，有必要探索T2新的合成途徑以提高其產(chǎn)量和質(zhì)量，從而最大化地為人類健康服務(wù)。
　　在參考國外少量T2合成方法的基礎(chǔ)上，綜合考慮其優(yōu)缺點，我們創(chuàng)新性地研發(fā)出了一種新的T2合成方法。其合成途徑可概括如下：用對羥基苯乙腈、3，4-

2、二羥基苯酚為初始化合物，用Hoesch反應(yīng)制成中間產(chǎn)物脫氧安息香，再用增碳關(guān)環(huán)制成4'-羥基-6，7-二甲氧基異黃酮，最后通過脫甲基保護(hù)反應(yīng)得到終產(chǎn)物T2。使用氫譜(1H NMR)、碳譜(13C-NMR)、質(zhì)譜分析確證反應(yīng)產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)，以保證合成準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性。對于最終產(chǎn)物T2還進(jìn)行了性狀分析、殘留溶劑和含量分析實驗，以確定合成質(zhì)量。通常水溶性好的化合物才能發(fā)揮出較好的生物效能，但T2本身水溶性差，因此有必要提高其水溶性。在純化T2的基

3、礎(chǔ)上，主要通過磺化反應(yīng)對其水溶性進(jìn)行改進(jìn)，最終挑選出水溶性較好的滿足生物實驗要求的T2衍生物。在生物評價方面，主要檢測和比較了T2和其水溶性衍生物的抗腫瘤效應(yīng)，包括體內(nèi)實驗和體外實驗兩個方面。體外實驗主要涉及T2及其水溶性衍生物對宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響、對線粒體膜電位的影響、對凋亡相關(guān)蛋白和細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的影響;體內(nèi)實驗主要觀察T2及其水溶性衍生物對荷瘤小鼠的腫瘤抑制效應(yīng)。最后，對水溶性衍生物的生物安全性或長期毒性進(jìn)行了初步評價，

4、主要包括外周血象改變情況、肝腎功生化檢測和肝、腎、卵巢病理檢查。
　　通過以上研究，我們成功地合成出了具有高收率和高純度(＞99％)的T2。水溶性改造方面，合成出4種T2水溶性衍生物即T2-Na、T2-SO3Na、T2-SO3H.2H2O和T2-SO3(NH4)2，其中T2-SO3(NH4)2水溶性最好，因此后期主要評價此衍生物的抗腫瘤活性。細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)T2-SO3(NH4)2和T2均能抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖，促進(jìn)Hela細(xì)胞

5、凋亡，降低線粒體膜電位，促進(jìn)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase3/7及Bcl-2的表達(dá)，減少細(xì)胞周期調(diào)控蛋白Cyclin D1、CDK2和CDK4的表達(dá)，但總體效果T2-SO3(NH4)2強(qiáng)于T2。在動物水平，發(fā)現(xiàn)靜脈注射T2-SO3(NH4)2和腹腔注射T2均能抑制荷瘤小鼠腫瘤生長并促進(jìn)原位腫瘤細(xì)胞凋亡，但T2-SO3(NH4)2效果更強(qiáng)。安全性評價方面，T2-SO3(NH4)2和T2對大鼠體重、外周血象和肝腎功影響不大;高劑量T2-SO