基于磁分離富集核酸適配體傳感器檢測(cè)食品中抗生素殘留.pdf

1、本研究基于納米過氧化物聚合物編碼探針、磁性分離技術(shù)以及競(jìng)爭(zhēng)性免疫方法構(gòu)建了一系列簡單、快速、靈敏、低成本的比色適配體傳感器方法，進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)食品中的氯霉素（chloramphenicol，CAP）殘留。構(gòu)建的免疫分析方法使用磁性納米復(fù)合物材料作為捕獲探針，不僅簡化了分離步驟，還增加了目標(biāo)物的富集量；分別使用生物高聚物Powervision、Envision作為載體，進(jìn)一步負(fù)載金屬編碼標(biāo)簽（納米金Au、氧化鈀PdO）制備不同的信號(hào)探針。負(fù)

2、載在捕獲探針上的適配體代替抗體識(shí)別靶分子發(fā)生特異性免疫反應(yīng)形成免疫復(fù)合物。磁性分離后，信號(hào)探針上的納米過氧化物酶復(fù)合物與顯色劑發(fā)生顏色反應(yīng)，可裸眼觀察進(jìn)行定性，也可進(jìn)行紫外可見光譜分析進(jìn)行定量。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴構(gòu)建了一種基于膠體金納米顆粒標(biāo)記 PowerVision（PV）試劑作為信號(hào)探針并結(jié)合磁性分離原理的新型比色適配體傳感器進(jìn)行靈敏性、選擇性地檢測(cè)氯霉素。在該測(cè)定方法中，CAP的適配體固定在Fe3O4@Au納米粒子

3、用作捕獲探針富集CAP?；パa(bǔ)DNA鏈（cDNA）和 PV共同標(biāo)記到膠體金納米粒子上，形成納米過氧化物聚合物作為信號(hào)探針。而信號(hào)探針能夠通過核酸適體和 cDNA雜交作用形成AuMNPs-Apt/cDNA-AuNPs-PV復(fù)合物。在CAP的存在下，適配體優(yōu)先結(jié)合CAP并在磁性作用下使得部分信號(hào)探針解離。負(fù)載在信號(hào)探針上的PV可以大大催化3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）發(fā)生顯色反應(yīng)，這種顏色變化能夠通過紫外可見光譜法進(jìn)行定量。⑵構(gòu)建

4、了一種基于適體的比色測(cè)定法測(cè)定CAP,該方法主要利用了抗單鏈DNA抗體(anti-ssDNA Ab)高特異性地識(shí)別單鏈DNA的能力以及PV的高催化能力。核酸適配體的互補(bǔ)固定到磁性納米顆粒上作為捕獲探針，anti-ssDNA Ab和PV共同結(jié)合到膠體金納米顆粒上形成信號(hào)探針，通過 anti-ssDNA Ab識(shí)別 ssDNA得到包含放大探針的磁珠(AuMNPs-cDNA@anti-ssDNA Ab/PV-AuNPs)。磁珠上的PV能夠可以大

5、大催化3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺發(fā)生顏色變化，通過紫外可見光譜法進(jìn)行定量。構(gòu)建的方法已經(jīng)成功應(yīng)用于真實(shí)樣品檢測(cè)中，檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫方法相一致。⑶構(gòu)建了一種新穎的比色適配體傳感器用于快速檢測(cè)魚肉和鵝肉中氯霉素（Chloramphenicol，CAP）。該研究結(jié)合了核酸適配體特異性結(jié)合目標(biāo)物的高選擇性能和氧化鈀納米顆粒（PdO）標(biāo)記聚合酶螯合物上（EnVision，EV）的信號(hào)放大效應(yīng)，能特異性、靈敏性地檢測(cè)樣品中痕量氯霉素。

6、EV上含有大約100個(gè)辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP），它能夠高效催化底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）產(chǎn)生顏色變化，并且PdO在一定程度上也能催化TMB出現(xiàn)藍(lán)綠色，因此該方法可達(dá)到雙重放大效果。同時(shí)，通過測(cè)定TMB吸光度的變化能對(duì)應(yīng)計(jì)算真實(shí)樣品中的氯霉素含量。結(jié)果表明，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，該方法具有較高的檢測(cè)靈敏度并在0.02-150 ng mL-1范圍內(nèi)具有良好的相關(guān)性，檢測(cè)下限是0.