kap26.1、kap11.1基因在遼寧新品系絨山羊皮膚中的表達(dá)及分析

1、分類號：密 級：學(xué)校代碼：1 0 1 6 5學(xué) 號：2 0 1 0 1 1 1 8 9遣掌師筢大學(xué)碩士學(xué)位論文K A P 2 6 ．1 、K A P 11 ．1 基因在遼寧新品系絨山羊皮膚中的表達(dá)及分析作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：張亭亭動物學(xué)動物遺傳育種金梅教授2 0 13 年6 月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘 要遼寧新品系絨山羊是我國獨(dú)有的寶貴品種，眾所周知，其具有產(chǎn)絨量高、品質(zhì)優(yōu)良等特點(diǎn)。羊絨一皮膚次級毛囊的發(fā)育產(chǎn)物，是

2、山羊的內(nèi)層毛被，其纖維具輕、滑、軟、暖等特點(diǎn)。絨具有優(yōu)良的品質(zhì)與角蛋白和角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白有密不可分的關(guān)系。角蛋白作為毛發(fā)的骨架，其含量和結(jié)構(gòu)都比較穩(wěn)定，但是在不同物種或同一物種中，角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白( K e r a t i na s s o c i a t e dp r o t e i n ，K A P ) 的含量卻有較大變化。因此，毛發(fā)基質(zhì)角蛋白K A P 可能影響毛發(fā)的品質(zhì)。為了探討K A P 基因的表達(dá)與絨山羊絨細(xì)度的關(guān)系，首先對K

3、A P l l ．1 、K A P 2 6 ．1 基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析。然后，通過R T ．P C R 檢測K A P l l ．1 、K A P 2 6 ．1 基因在各內(nèi)臟組織中的表達(dá)。然后通過熒光定量P C R 技術(shù)檢測毛囊生長周期中的三個(gè)時(shí)期K A P l 1 ．1 、K A P 2 6 ．1 基因在初、次級毛囊中的表達(dá)差異；最后利用原位雜交定位檢測K A P l 1 ．1 、K A P 2 6 ．1 基因在初、次級毛囊中表達(dá)位

4、點(diǎn)。( 1 ) 生物信息學(xué)分析可以看出：K A P l l ．1 基因能夠表達(dá)1 5 9 個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，這些氨基酸中半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸的含量較高，而天冬氨酸、組氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸的含量卻偏低。蛋白結(jié)構(gòu)域分析結(jié)果顯示，K A P l 1 ．1 含有P M G 蛋白結(jié)構(gòu)域。K A P 2 6 ．1 基因由1 8 4 個(gè)氨基酸組成，具有相對低的天冬氨酸，甲硫氨酸，半胱氨酸，色氨酸含量，較高的亮氨酸和絲氨酸含量，并且還具有

5、一個(gè)絲氨酸富集區(qū)。( 2 ) 半定量R T ．P C R 結(jié)果顯示：K A P l l ．1 基因在皮膚、心臟、肝臟中都有表達(dá)，但在腎、肺、脾中未發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。但是在遼寧新品系絨山羊的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟組織中均未檢測到K A P 2 6 ．1 的表達(dá)， K A P 2 6 ．1 基因特異表達(dá)于皮膚。( 3 ) 實(shí)時(shí)熒光定量P C R 結(jié)果顯示：毛囊興盛期K A P l 1 ．1 基因在次級毛囊的表達(dá)量約為初級毛囊的2 ．5 倍，

6、在毛囊生長退行期K A P l 1 ．1 基因在初級毛囊的表達(dá)量為次級毛囊的2 倍。在毛囊興盛期，K A P 2 6 ．1 在次級毛囊中的表達(dá)量為初級毛囊4 ．7 4 倍，且差異極為顯著；進(jìn)入毛囊退行期，K A P 2 6 ．1 在初級毛囊中的表達(dá)量為次級毛囊3 ．8 4 倍，且差異極為顯著。( 4 ) 原位雜交分析發(fā)現(xiàn)，K A P l l ．1 基因在內(nèi)根鞘有表達(dá)，毛球部有少量表達(dá)，而在基質(zhì)細(xì)胞中有大量表達(dá)。而K A P 2 6 ．1