遼寧新品系絨山羊蛋白家族四個(gè)基因在皮膚中的表達(dá)及分析.pdf

1、遼寧新品系絨山羊是我國(guó)嚴(yán)禁流向境外的珍貴遺傳資源,其單只產(chǎn)絨量居全國(guó)首位。羊毛、羊絨的角蛋白組成和含量與其纖維的品質(zhì)有密切關(guān)系,由于絨和毛的角蛋白組分是相似的,但二者的品質(zhì)卻相差極大,因此從毛囊中各種角蛋白家族及其關(guān)聯(lián)蛋白家族基因的表達(dá)入手,找出其中的差異,是實(shí)現(xiàn)控制絨毛纖維品質(zhì)的關(guān)鍵。
　　 遼寧新品系絨山羊絨毛纖維的形成主要與微絲角蛋白(KIFs)和微絲角蛋白關(guān)聯(lián)蛋白(KAPs)的表達(dá)有關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)中,在毛囊興盛期利用遼寧新

2、品系絨山羊皮膚組織構(gòu)建cDNA文庫(kù),測(cè)序得到1986條EST序列,經(jīng)拼接得到243條contigs和883條singles。利用Blastx進(jìn)行功能分類,結(jié)果顯示,,其中有14類編碼絨毛結(jié)構(gòu)蛋白的基因。隨后通過(guò)兩個(gè)方面進(jìn)行研究:
　　 第一,高甘氨酸/酪氨酸家族基因KAP6-1.2、KAP6-1.4、KAP8.1基因在皮膚中的表達(dá)。(1)通過(guò)Real rime PCR研究三個(gè)基因在遼寧新品系絨山羊毛囊興盛期初、次級(jí)毛囊中的表達(dá)差

3、異,結(jié)果顯示KAP6-1.4在次級(jí)毛囊中的表達(dá)量約為初級(jí)毛囊的1.5倍,差異明顯(P<0.05),KAP6-1.2、KAP8.1在初、次級(jí)毛囊中的表達(dá)量差異不明顯。(2)利用半定量RT-PCR檢測(cè)上述三個(gè)基因在各上皮組織中的表達(dá),結(jié)果證明,三個(gè)基因特異地表達(dá)于皮膚。(3)利用原位雜交技術(shù)對(duì)KAP6-1.2、KAP6-1.4、KAP8.1基因在遼寧新品系絨山羊皮膚初、次級(jí)毛囊中的表達(dá)進(jìn)行定位分析,結(jié)果顯示上述三個(gè)基因均在次級(jí)毛囊的皮質(zhì)層中

4、部或上部表達(dá)。其中,KAP-1.2基因在初級(jí)毛囊中存在不對(duì)稱表達(dá),而KAP8.1基因存在對(duì)稱和不對(duì)稱表達(dá),且KAP8.1還在毛球彎曲處檢測(cè)到微弱的表達(dá)信號(hào)。三個(gè)基因均在遼寧新品系絨山羊初、次級(jí)毛囊的內(nèi)根鞘中表達(dá),KAP8.1還在初級(jí)毛囊中的髓質(zhì)層中檢測(cè)到表達(dá)信號(hào)。通過(guò)以上結(jié)果,可以推測(cè)KAP6-1.2、KAP6-1.4、KAP8.1基因可能與絨毛纖維直徑以及遼寧新品系絨山羊絨毛品質(zhì)相關(guān)。
　　 第二,在1986條EST序列中發(fā)現(xiàn)

5、了一條全長(zhǎng)eDNA序列,與其他已知序列表現(xiàn)出相似性,稱為角蛋白26(K26)。(1)生物信息分析結(jié)果顯示,K26基因能夠編碼含有468個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),K26蛋白表現(xiàn)出較高的組氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸含量及較低的精氨酸、異亮氨酸、半胱氨酸含量,此外,它還具有一個(gè)甘氨酸富集區(qū)域。二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示,K26含有較高比例的α-螺旋結(jié)構(gòu)(55.98％)。進(jìn)化分析顯示K26與K25、K27的關(guān)系較近。(2)通過(guò)RT-PCR結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)K26特異地表達(dá)于皮