透明顫菌血紅蛋白在γpga合成菌b.amyloliquefaciensll3中的表達

1、南開大學碩士學位論文透明顫菌血紅蛋白在γ--PGA合成菌B.amyloliquefaciensLL3中的表達姓名：解慧申請學位級別：碩士專業(yè)：微生物學指導教師：宋存江2012-05A b s t r a c tA b s t r a c tP o l y ( 7 - g l u t a m i c a c i d ) ( 7 - P G A ) i s a w a t e r s o l u b l e p o l y m e r ，w

2、 i t ht h eo u t s t a n d i n gc h a r a c t e r i s t i c s o fb i o c o m p a t i b a l ，b i o d e g r a d a b l e ，n o n t o x i c a n d e d i b l e ．7 - P G Ac o u l d b e w i d e l y u s e d i n c o s m e t i c ，f

3、o o d ，a { 如c u l t u r e ，m e d i c a t i o n ，e t c ．F e r m e n t a t i o n w i t h7 - P G Ap r o d u c i n g m i c r o o r g a n i s m c o u l d g a i n h i 曲y i e l d ，b ee f f e c t i v e l yc o n t r o l e da n d

4、p u t i n t om a s s p r o d u c t i o n ．B ．a(chǎn) m y l o l i q u e f a c i e n sL L 3 c o u l ds y n t h e s i s i ? - P G A Ⅵr i t h o u tg l u t a m a t e ．H o w e v e r ,t h ea c c u m u l a t i o no f 7 - P G A i n t h

5、 eb r o t hg r e a t l yi n c r e a s e sv i s c o s i t ya n dr e d u c e dt h ec o n c e n t r a t i o no fd e s s o l v e do x y g e n ( D o ) ，w h i c h l e a dt ot h e r e s u l t t h a to x y g e ni s t h el i m i

6、t i n gf a c t o ri np r o d u c i n g 7 - P G A b ym i c r o o r g a n i s m s ．V H b ( V i t r e o s c i l l ah e m o g l o b i n )i s t h e m o s td e e p l ys t u d y e d p r o k a r y o t i ch e m o g l o b i n ．V H

7、 bc o u l df a c i l i t a t e o x y g e nd i f f u s i t i o n ，i m p r o v et h e r e s p i r a t i o na n dm e t a b o l i s mr a t e ，i n c r e a s et h eb i o m a s sa n dm e t a b o l i t es y n t h e s i s ．I n t

8、e g r a t i o no fv g bi n t ot h eh o s t ’Sg e ：n o m eo p e n s u pa n e w w a yo f o v e r c o m i n g l o wc o n c e n t r a t i o n o f D O i nf e r m e n t a t i o n ．F i r s t l y , w eo p t i m i s e d t h ee l

9、e c t r o t r a n s f o r m a t i o n c o n d i t i o n so f L L 3 ．U n d e r t h eo p t i m a lc o n d i t i o n s ，t h e t r a n s f o r m a t i o nr a t eo f L L 3 i s7 ．6 x 10 2t r a n s f o r m a n t s ／u gD N A ．v

10、g b w a s o b t a i n e d b y c l o n e df r o mV i t r e o s c i l l as t e r c o r a r i aA T C C 15 2 18 ．p W H l 5 2 0i S aE c o l i —S u b t i l i s s h u t t l e v e c t o r ．W h i c h h a s ax y l o s e i n d u c

11、e dp r o m o t e r , a n dc o u l db eu e s dt o e x p r e s se x o g e n o u s g e n e s i nS u b t i l i s ．v g bw a s c l o n e di n t o p W H 15 2 0a n dt h e r e c o b i n e d p l a s m i dp W H V w a st r a n f o r

12、 m e d i n t o L L 3 ．T h eo r t h o g o n a l e x p e r i m e n t a l d e s i g n w a s c a r r i e d o u t t o o p t i m i z e t h e f e r m e n t a t i o nc o n d i t i o n s o f L L 3 ( p W H V ) ，w h i c h s h o w e

13、 d t h eh i g h e s t7 - P G A y i e l do f 2 5 ．2 9 ／La n di n c r e a s e d b y 9 ．5 6 ％．H o w e v e r , t h eL L 3 ( p W H P V ) i n w h i c h 啦i s r e g u l a t e d b y s t r o n gp r o m o t e rP 4 3 p r o d u c e d

14、 2 3 ．7g ／L7 - P G A ．T h e p r o p e r e x p r e s sl e v e lo f V H b i si m p o r t a n ti ne n h a n c i n g7 - P G A p r o d u c t i o n ．T oo v e r c o m e t h e i n s t a b i l i t yo fp W H 15 2 0a n d s t a b l

15、e e x p r e s s i n go fV H b ，a ni n t e g r a t i o n v e c t o r , p K S V P V K ，w a s c o n s t r u c t e d ．T h e p K S V P V K i s t e m p r a t u r es e n s i t i v e a n d c o n t a i n st w o h o m o l o g o u