2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、聚γ-谷氨酸(polyγ-glutamicacid;γ-PGA)是一種應(yīng)用前景良好的生物高分子材料。地衣芽胞桿菌(Bacilluslicheniformis)WX-02是γ-PGA的產(chǎn)生菌,其發(fā)酵液由于較粘稠而導(dǎo)致溶氧很差,溶氧成為γ-PGA產(chǎn)量提高的限制性因素之一。透明顫菌血紅蛋白(VHb)是一種來源于原核生物的氧結(jié)合蛋白。本研究旨在B.licheniformisWX-02中表達透明顫菌血紅蛋白基因(vgb)來改善其發(fā)酵過程中氧的利用

2、效率,進而改善菌體生長,提高產(chǎn)量。 本研究構(gòu)建了能整合于芽胞桿菌染色體上的表達載體pDG1730-vgb,其含有芽胞桿菌α-淀粉酶基因的整合位點,通過Spizizen感受態(tài)轉(zhuǎn)化導(dǎo)入B.licheniformisWX-02中,PCR驗證表明vgb成功整合到其染色體上;經(jīng)CO差光光譜分析,重組菌株B.licheniformisM2有VHb表達活性;搖瓶發(fā)酵實驗結(jié)果顯示,搖床轉(zhuǎn)速為180r/min,發(fā)酵36h的條件下,250mL三角瓶

3、中發(fā)酵液裝液量為50mL時,M2的生物量和γ-PGA產(chǎn)量分別為4.5g/L和27.71g/L,高于出發(fā)菌株WX-026.43%和6.74%;裝液量為100mL時,M2發(fā)酵的生物量和γ-PGA產(chǎn)量分別為4.17g/L和26.59g/L,高于出發(fā)菌株WX-0215.02%和21.7%。vgb的表達促進了菌體和γ-PGA產(chǎn)量的增長,產(chǎn)物比生物量的增長明顯,促進效果隨著供氧條件的降低而增加。3L發(fā)酵罐分批發(fā)酵結(jié)果顯示,攪拌轉(zhuǎn)速為600r/min

4、,通氣量為2L/min時,M2的生物量(OD600)達到7.39,比出發(fā)菌株WX-02提高了25.5%,γ-PGA產(chǎn)量達到33.5g/L,比WX-02提高了20%,進一步證實VHb蛋白的表達對γ-PGA產(chǎn)量和菌體生長的促進作用。 整合載體pDG1730-vgb在高產(chǎn)γ-PGA的枯草芽胞桿菌W003中的整合表達已有初步結(jié)果,本研究還構(gòu)建了另一個整合載體psacB-vgb,含有枯草芽胞桿菌果聚糖酶基因(sacB)的整合位點,其在高產(chǎn)

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