福眼龍眼(dimocarpuslonganlour.cv.fuyan)pod的分離純化與若干采后生理的初步研究

1、福建農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文福眼龍眼（Dimocarpus longan Lour.cv.Fuyan)POD的分離純化與若干采后生理的初步研究姓名：林琳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：潘東明2003.5.1A b s t r a c tP e r o x i d a s e ( P O D ) a n d p o l y p h e n o lo x i d a s e 《P P O ) p l a y t h ei m p o r

2、 t a n t r o l e s o f l o n g a nb r o w n i n gi np e r i o do f p o s t h a r v e s ts t o r a g e ．P O Dw a s e x t r a c t e df r o ml o n g a n ( D i m o c a r p u s l o n g a nL o t s “ ．c v ．F u y a n 、f r u i t

3、d u r i n g i t s m a t u r a t i o n w i t h e x t r a c t i o n b u f f e r ．T h e c r u d e e n z y m e e x t r a c t w a sf r a c t i o n a t e dw i t hs o l i da m m o n i u m s u l f a t eb e t w e e n3 0 ％a n d8 0

4、 ％s a t u r a t i o n ，t h e nt h ee n z y m es o l u t i o nw a s d e s a l t e db yS e p h a d e x G - 2 5 c o l u m nc h r o m a t o g r a p h y ，s e p a r a t e d b y D E A E ·C e l l u l o s ec o l u m n c h r

5、o m a t o g r a p h y ，h y d r o x y a p a t i t e ( H A ) c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y a n d S e p h a c r y l S - 2 0 0H Rc o l u m nc h r o m a t o g r a p h yr e s p e c t i v e l y ．F o u rs e p a r a t e

6、 df r a c t i o n so fl o n g a nP O D sw e r ep u r i f i e dw h e n d e t e c t e d f o rp r o t e i nw i t ht h es i l v e rs t a i n a f t e r5 ％～2 0 ％n a t i v el i n e a rg r a d i e n t f l a t t e dp o l y a c r

7、y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i su s i n gs e m i ·d r y t e c h n i q u e ，a n dc o r r e s p o n d e dt om o l e c u l a rw e i g h t so f 2 9 0 ．1 K D ．2 3 2 ．1 K D 。1 8 8 ．5 K Da n d1 7 0 ．7 K D ．F

8、 o u rd i f f e r e n tf r a c t i o n sw e r e s e p a r a t e dw h e nc o m p a r e dw i t hp o l y a c r y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s ．T h ep r e d o m i n a n ts u b u n i to f5 6 ．4 K Dw a s s h o

9、 w e d b y s o d i u m d o d e c y l s u l f a t e ·p o l y a c r y l a m i d e g e l e l e c t r o p h o r e s i s ( S D S - P A G E ) ，s u g g e s t e dt h a t t h e i s o e n z y m e so fP O D w h i c h m o l e c

10、 u l a rw e i g h t s 2 9 0 ．1 K D ，2 3 2 ．I K D a n dl7 0 ．7 K D a r e p e n t a m e r , t e t r a m e r a n d t f i m e r r e s p e c t i v e l y ．I t i s s u p p o s e d t h a t o n e o ft h ei s o e n z y m e s o f P

11、 O D w h i c h m o l e c u l a r w c i g h t i s1 8 8 ．5 K D i s a k i n d o f h e t e r o p o l y m e r ．P O Da n d P P Os h o w e d t h e s a m e r e l a t i v e m o b i l i t i e s i n i s o e n z y m ep o l y a c r y

12、 l a m i d e g e le l e c t r o p h o r e s i s ．T w oa c t i v e p e a k so fP O D w e r e ：s e p a r a t e dt h r o u g hD E A E ．C e l l u l o s ec o l u m nc h r o m a t o g r a p h y ．t h ef o r m e ri sm u c h h i

13、g h e rt h a nt h el a t t e r ．T h ef o u rf r a c t i o n so f p u r i f i e dP O Da r ei nt h ef o r m e r p e a k ．P r o p e r t i e so f t h e p u r i f i e dP O D s w e r e s t u d i e d ，T h er e s u l t ss h o w

14、e d t h e o p t i m a jp H o f P O D w i t hg u a i a c o li s 7 ．0 ，8 ．5a n d9 ．0w i t ht h es u b s t r a t e so f 4 - m e t h y t l e a t e c h o la n dc a t e c h o l ，r e s p e c t i v e l y ．M o r e o v e r , t h e

15、P O D ss h o w e dt h ea c t i v i t i e so f P P O ．I no u rp r e l i m i n a r ye x p e r i m e n t s ，w i t ht h es u b s t r a t e s o f4 - m e t h y t l c a t e e h o l a n d e a t e c h o l ，t h e P O D s a p p e a

16、 r e d d i f f e r e n t P P O k i n e t i cc h a r a c t e r i s t i c s ．T h ea c t i v i t yw i t h 4 - m e t h y t l c a t e c h o l w a s a s c e n d i n g f r o m p H 6 ．0 t op H 8 ．0 ．I nt h e t h e s i s ，t h er

17、e l a t i o n s h i pb e t w e e n P O D ，P P O a n d t h e s e n e s c e n c e a n d b r o w n i n g o f l o n g a nf r u i td u r i n gp o s t - h a r v e s t h a n d l i n gw a s d i s c u s s e d ．S o m ep h y s i o

18、l o g i c a l a s p e c t sr e l a t e d t o t h es e n e s c e n c e a n db r o w n i n go fl o n g a nf r u i t w e r ep r i m a r i l y i n v e s t i g a t e da sw e l Ji nt h i st h e s i s ．K e y w o r d s ：l o n g