2.2kb乙型肝炎病毒基因組剪接變異體剪接特異性新蛋白對huh7肝細胞基因表達的影響

1、Y1 1 0 8 8 6 z福建醫(yī)科大學碩士研究生畢業(yè)論文22 k b 乙型肝炎病毒基因組剪接變異體剪接特異性新蛋對H u h 7 肝細胞基因表達的影響E f f e c t so f t h e s p l i c i n g - s p e c i f i cn o v e lp r o t e i n s e n c o d e d b y t h e2 ．2 K bs p l i c e d v a r i a n t so f

2、 h e p a t i t i s B v i r u s g e n o m e o i lg e n ee x p r e s s i o np r o f i l e i nH u h 7 h e p a t o c y t e s所在院( 系) ：研 究生：學科( 專業(yè)) ：導 師：研究起止日期：基礎(chǔ)醫(yī)學院軺丹華生物化學與分子生物學# 旭教授# 建韞教授2 0 0 5 年8 月至2 0 0 7 年1 月o o 七年四月2 ．2

3、 k b 乙型肝炎病毒基因組剪接變異體剪接特異性新蛋白對H u h 7 肝細胞基因表達的影響摘要乙型肝炎病毒基因組剪接變異體( s p l i c e dv a r i a n t so f h e p a t i t i s B v i r u sg e n o m e s )是一大類基因部分缺失的亞基因組D N A ，由乙型肝炎病毒( H e p a t i t i s B v i r u s ，H B v )前基因組R N A (

4、 p r e g e n o m i c R N A ，p g R N A ) 經(jīng)剪接并逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生t ”。在已經(jīng)分離到的H B V 剪接變異體中，長度約為2 ．2 k b 的剪接變異體占8 0 ％t ”，此類變異體主要分為單剪接與雙剪接兩種類型。研究顯示這兩種H B V 基因組剪接變異體編碼的剪接特異性新蛋白與病毒的持續(xù)性感染及致病性相關(guān)I ““，但其確切的致病機制迄今不明。本研究通過人類基因表達譜芯片研究分析這兩種剪接特異性新蛋白對H

5、 u h 7 肝細胞基因表達的影響，探尋它們可能的致病機制。本研究第一部分旨在構(gòu)建剪接特異性新蛋白真核表達載體，并證實其在肝細胞中的表達．為此將剪接特異性新蛋白編碼區(qū)克隆到真核表達載體p c D N A 3 ．1 ／H i s C ，獲得重組載體p c D N A 3 ．1 ／H i s C ．T P d s ( 雙剪接型) 、p c D N A 3 ．1 ／H i s C - T P s s ( 單剪接型) ，瞬時轉(zhuǎn)染H u h 7

6、肝細胞，以A n t i - X p r e s s 抗體進行W e s t e r n B l o t 檢測融合蛋白，證實剪接特異性新蛋白可在H u h 7 肝細胞中表達。本研究第二部分以p e D N A 3 ．1 ／H i s C 、p c D N A 3 ．1 ／H i s C - T P d s 、p e D N A 3 ．1 ／H i s C - T P s s 分別瞬時轉(zhuǎn)染H u h 7 肝細胞，提取轉(zhuǎn)染細胞總R N A