河川沙塘鱧（Odontobutis potamophila）在太湖環(huán)境雌激素檢測中的應(yīng)用研究.pdf

1、太湖是長三角地區(qū)最大的淡水湖，是上海和浙東地區(qū)的主要水源地。近年來太湖的污染狀況引起了全社會的廣泛關(guān)注。太湖中豐富的野生魚類資源是對其進行環(huán)境監(jiān)測時最有效的指示生物。 河川沙塘鱧(Odontobutispotamophila(Günther)，Gobbidfish)屬鱸形目，塘鱧科，俗名塘鱧魚，為淡水底棲小型野生肉食性魚類，分布于我國長江水系中下游、錢塘江、閩江等水系。該物種處于水生生態(tài)系統(tǒng)食物鏈的較高層級，對環(huán)境中的污染物具

2、有一定的生物富集效應(yīng)。本實驗室對太湖地區(qū)河川沙塘鱧的食性、生長、繁殖等生物學(xué)性質(zhì)有較詳細的研究，故本文選用該種魚作為模型動物，建立了環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的實驗室和太湖地區(qū)野外監(jiān)測方法。以期為太湖地區(qū)以及其他水體環(huán)境污染監(jiān)測研究提供基礎(chǔ)資料和技術(shù)。 利用雄魚、幼魚血清卵黃蛋白原(Vitellogenin，Vtg)水平變化作為水環(huán)境中類雌激素物質(zhì)監(jiān)測的生物標(biāo)志物已經(jīng)成為一種國際通行的研究方法。但是，Vtg量少，分離純化難度較大，使該方

3、法在野外研究和推廣方面受到制約。本文利用Vtg的衍生蛋白，卵黃脂磷蛋白(LV)為抗原，建立了一套監(jiān)測河川沙塘鱧血漿Vtg的ELISA方法。 通過DEAE-CelluloseDE52離子交換層析和SephacrylS-300凝膠層析純化了河川沙塘鱧卵黃磷脂蛋白(LV)和卵黃蛋白原(Vtg)。LV的分子量約為440kD，卵黃脂磷蛋白的3個亞基團分子量大小分別約為：105kD、41.18kD、31.30kD。Vtg的分子量約為556

4、.5kD，主要亞基大小為110kD。 利用河川沙塘鱧卵黃脂磷蛋白(LV)制備抗血清，檢測其與Vtg的交叉反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)，LV和Vtg的分子結(jié)構(gòu)雖然不同，但是仍有很好的免疫共性。為此，以兔抗LV血清(ant-LV)為一抗，建立了間接競爭ELISA檢測方法。此法的最低檢測下限為40ng/mL，有效工作區(qū)間為160～1280ng/mL，在此范圍內(nèi)有很好的線性關(guān)系。 以雌二醇(E2)和壬基酚(NP)為環(huán)境內(nèi)分泌干擾參照物在實驗室

5、誘導(dǎo)河川沙塘鱧雄性個體產(chǎn)生Vtg，用自建的ELISA方法檢測，顯示出良好的劑量—效應(yīng)關(guān)系。E2的最低有效誘導(dǎo)濃度是0.001mg/kg(E2/魚體重)，NP的最低有效濃度是50mg/kg(NP/魚體重)。 首次利用實驗室建立的監(jiān)測方法，對太湖東山、周鐵、望亭等地水域的河川沙塘鱧進行了環(huán)境雌激素類污染效應(yīng)檢測，在東山和周鐵等地的樣品中發(fā)現(xiàn)有陽性反應(yīng)。2005年在東山水域進行了為期一年的采樣檢測，其中在3、4月份分別有50％和35

6、％樣品呈陽性。說明該地區(qū)水體中存在有雌激素類物質(zhì)。 壬基酚(NP)和苯并芘(BaP)的聯(lián)合暴露顯示，BaP能導(dǎo)致河川沙塘鱧雄性個體血清E2含量上升，并抑制NP誘導(dǎo)雄魚血漿Vtg表達，同時還可誘導(dǎo)肝臟EROD酶活性和抑制肝臟SOD酶活性，實驗中的最低有效濃度組合均為2mg/kg的BaP(BaP/魚體重)+200mg/kgNP(NP/魚體重)。 高劑量的NP(200mg/kgNP/魚體重)能導(dǎo)致雄性河川沙塘鱧血清中谷草轉(zhuǎn)

7、氨酶活性和肝臟SOD酶活性增加，說明該物質(zhì)高濃度時可對肝細胞造成一定的傷害。NP對肝臟SOD酶活性的誘導(dǎo)可被BaP抑制。 使用BaP對雌性河川沙塘鱧進行暴露的結(jié)果顯示，BaP能抑制雌性河川沙塘鱧血清E2和Vtg含量。實驗中的最低有效濃度為2mg/kg的BaP(BaP/魚體重)。BaP單獨暴露對雌性河川沙塘鱧血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活性和肝臟SOD酶活性的誘導(dǎo)/抑制不存在明顯的濃度效應(yīng)關(guān)系，但20mg/kgBaP(BaP/魚體重)可以誘導(dǎo)