全國流感監(jiān)測技術(shù)指南

1、附件附件2：流感監(jiān)測實驗技術(shù)操作規(guī)范流感監(jiān)測實驗技術(shù)操作規(guī)范一、流感監(jiān)測臨床標(biāo)本的采集、運送、處理及流感病毒株的運輸一、流感監(jiān)測臨床標(biāo)本的采集、運送、處理及流感病毒株的運輸（一）流感臨床標(biāo)本的采集病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標(biāo)本的采集時間、質(zhì)量及其保存和運輸?shù)拳h(huán)節(jié)。多數(shù)標(biāo)本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織。標(biāo)本采集后應(yīng)立即放入適當(dāng)?shù)牟蓸右褐械蜏乇４?。常用的采樣液有以下三種：pH7.4～7.6的Hanks

2、、Eagles或者DMEM培養(yǎng)基。為防止采樣液生長細(xì)菌和真菌，在采樣液中可加入抗菌素，加入慶大霉素（終濃度為1mgmL，Gibcocat.no.15750078）和或制霉菌素（終濃度為50UmL）。加入抗菌素以后重新調(diào)節(jié)pH值至7.4，分裝每個采樣管3mL，20℃凍存。常用采樣方法有以下幾種：1.鼻拭子：將帶有聚丙烯纖維頭的拭子平行于上顎插入鼻孔，旋轉(zhuǎn)，保持?jǐn)?shù)秒，待拭子頭吸收分泌物以后，緩慢轉(zhuǎn)動退出。以另一拭子拭另側(cè)鼻孔。將拭子頭浸入采

3、樣液中，棄去尾部。2.咽拭子：用帶有聚丙烯纖維頭的拭子適度用力擦拭雙側(cè)扁桃體及咽后壁，應(yīng)避免觸及舌部。同樣將拭子頭浸入采樣液中，棄去尾部。注：注：亦可將鼻、咽拭子收集于同一采樣管中，以便提高分離率，減少工作量。3清液可直接接種或低溫保存。組織標(biāo)本的處理：取肺組織標(biāo)本放至平皿中，用滅菌生理鹽水清洗肺組織2～3遍，研磨成組織懸液，配置成10％～20％的組織懸液，2000rpm離心10min，加入抗菌素，取上清直接接種。注：注：如原始采樣液中

4、未加入抗菌素，應(yīng)在標(biāo)本接種前補加，慶大霉素終濃度為10mgmL，青鏈霉素（終濃度:青霉素G100UmL硫酸鏈霉素100μgmL），混勻后置4℃過夜或作用2h后進(jìn)行接種。臨床標(biāo)本處理后，將原始標(biāo)本分為三份，一份用于雞胚接種，一份用于MDCK細(xì)胞接種，一份保存待復(fù)核用。對于病毒分離陽性的原始標(biāo)本70℃至少保存6個月，在收到國家流感中心復(fù)核鑒定報告后，按照生物安全有關(guān)規(guī)定處理；病毒分離陰性的標(biāo)本隨時按生物安全的有關(guān)規(guī)定處理。（四）血清標(biāo)本的采

5、集、處理、運輸和保存血清標(biāo)本多用于流感暴發(fā)時的血清學(xué)核實診斷。血清標(biāo)本采集應(yīng)該包括急性期和恢復(fù)期雙份血清單份血清不能用作診斷。急性期血樣應(yīng)盡早采集，可在采集病毒分離標(biāo)本的同時采集，但不能晚于發(fā)病后7天?；謴?fù)期血樣則在發(fā)病后2～4周采集。一般采集空腹血。1.取一根體積5mL以上，無菌的血清管做好標(biāo)記，并進(jìn)行登記。登記的內(nèi)容包括：醫(yī)院名稱、患者姓名、性別、急性期（Acute，A）或是恢復(fù)期（Convalescence，C）、采樣日期（年，月