免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

1、免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)服務(wù)免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)服務(wù)一、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的概述免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistryICC)——是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定細(xì)胞內(nèi)抗原的成分(主要是多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫細(xì)胞化學(xué)。免疫細(xì)胞化學(xué)是將免疫學(xué)基本原理與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)相結(jié)合所建立起來(lái)的新技術(shù)，根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)某

2、種多肽、蛋白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大分子物質(zhì)的存在與分布?！揪R生物】(一)對(duì)抗原和抗體的要求具有特異性高和親和力強(qiáng)的抗體是實(shí)驗(yàn)成功的首要條件。–對(duì)抗體的要求：純度高、比活性強(qiáng)；高度特異性抗體的獲得，取決于抗原的純度。–對(duì)抗原的要求：純度高，免疫原性強(qiáng)，穩(wěn)定無(wú)變化。(二)抗原(antigenAg)抗原的概念：凡是在機(jī)體內(nèi)引起體液免疫和(或)細(xì)胞免疫反應(yīng)的物質(zhì)，稱為抗原?？乖哂袃蓚€(gè)方面的特性：–免疫原性：引起機(jī)體產(chǎn)生抗體和(或)致敏淋細(xì)

3、胞的特性；–免疫反應(yīng)性：抗原能與相應(yīng)的抗體及致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異的結(jié)合或反應(yīng)的特性。根據(jù)抗原是否顯示免疫原性分為：–完全抗原：分子量較大，一般在10kDa以上，并具有較復(fù)雜的化學(xué)組成。?免疫原性最強(qiáng)的是蛋白質(zhì)抗原，多糖次之；脂類(lèi)和核酸必需和蛋白質(zhì)及多糖形成復(fù)合物才具有良好的免疫原性。–半抗原：又稱為不完全抗原，分子量較小。例如：某些短肽、多糖、類(lèi)脂和藥物等。?半抗原必需與載體結(jié)合，才能獲得免疫原性。載體通常是具有高度免疫原性的大分子物質(zhì)

4、，具有將免疫原性傳遞給耦聯(lián)的半抗原能力。–常用的載體有鑰孔血藍(lán)蛋白(keyholelimpethemocyanin，KLH)、牛血清白蛋白(bovineserumalbuminBSA)、卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)等。–用戊二醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過(guò)功能基團(tuán)NH2、COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為5kDa結(jié)合5～25個(gè)分子的小肽。（三）抗體(antibodyAb)1、抗體的概念：機(jī)體受到抗原刺激后，由漿細(xì)胞合成并

5、分泌出一類(lèi)具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白，被稱為抗體。–抗體主要存在于血清內(nèi)；–抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不一定都是抗體。–免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種，既IgG、IgD、IgE、IgA、IgM。2、免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體：?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體。單克隆抗體：是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，是應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備的。–特異性強(qiáng)、抗體產(chǎn)量高。多克隆抗體：是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后，從動(dòng)物血

6、中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。–特異性低，會(huì)產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)。–多克隆抗體廣泛應(yīng)用于石蠟包埋組織切片，可減少假陰性染色機(jī)會(huì)。–抗原與抗體的結(jié)合，要求量保持一定比例，當(dāng)抗原或抗體過(guò)量時(shí)，是不能聚合成大顆粒。3、抗體的制備——多克隆抗體的制備動(dòng)物的選擇佐劑(adjuvant)免疫方法免疫劑量抗體效價(jià)的測(cè)定放血或定期抽血(1)動(dòng)物的選擇選擇什么動(dòng)物免疫取決于：所需抗血清的量–小鼠只能提供1.0～1.5ml的血液