化學(xué)去細胞異體及異種神經(jīng)移植相關(guān)免疫因素的實驗研究.pdf

1、目的:通過對化學(xué)去細胞神經(jīng)組織學(xué)和移植后的相關(guān)免疫學(xué)因素的研究證實經(jīng)化學(xué)萃取的去細胞異體及異種神經(jīng)用于周圍神經(jīng)缺損修復(fù)的可行性，為其臨床應(yīng)用提供實驗根據(jù)。 材料和方法:在第一部分實驗中進行了化學(xué)去細胞神經(jīng)移植物的制備，其中包括同種異體及異種神經(jīng)的取材及化學(xué)萃取處理，然后對其進行組織學(xué)研究。我們在20只C57BL/6小鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)上取直徑0.3mm，長1.5cm的40條神經(jīng)，并在7只新西蘭大白兔的雙側(cè)前臂尺神經(jīng)上切取直徑0.3m

2、m，長1.5cm的38條尺神經(jīng)，其中2條新鮮神經(jīng)留作組織學(xué)研究的對照。將兩組神經(jīng)以TritonX-100和脫氧膽酸鈉溶液進行去細胞化學(xué)萃取處理。處理后神經(jīng)進行保存以作為第二部分實驗的神經(jīng)移植物并留下經(jīng)去細胞處理過的新西蘭大白兔神經(jīng)2條進行組織學(xué)研究。隨后對2條新鮮異種神經(jīng)與經(jīng)化學(xué)萃取處理的2條異種神經(jīng)制作切片進行組織學(xué)觀察，包括：HE染色、髓鞘染色、層粘連蛋白免疫組化染色及纖維素染色。 在第二部分實驗中，在前面進行化學(xué)去細胞神經(jīng)

3、移植物的制備基礎(chǔ)上，通過植入不同類型的小鼠同種異體和異種神經(jīng)，觀察移植后免疫排斥中脾臟T細胞的總數(shù)與亞群、部分相關(guān)淋巴因子等相關(guān)免疫因素的變化。192只BALB/C小鼠隨機分成假手術(shù)組、新鮮自體神經(jīng)移植組、新鮮同種異體神經(jīng)移植組、新鮮異種神經(jīng)移植組、化學(xué)去細胞同種異體神經(jīng)移植組和化學(xué)去細胞異種神經(jīng)移植組各32只。每組小鼠股部植入相應(yīng)類型的神經(jīng)。然后分別在神經(jīng)植入術(shù)后3、7、14、28天把各組的8只小鼠取出脾臟、剪碎、磨勻、裂解、離心，對

4、每組每只小鼠的淋巴細胞進行計數(shù)。用FITC特異性熒光標(biāo)記的CD3、CD4、CD8單克隆抗體作用后，F(xiàn)ACS流式細胞儀檢測，計數(shù)10，000個淋巴細胞，得到T淋巴細胞及其亞群百分數(shù)；同樣，用FITC特異性熒光標(biāo)記的TNF-α、IL-2、IFN-γ，以及PE特異性熒光標(biāo)記的CD25單克隆抗體作用后，F(xiàn)ACS流式細胞儀檢測，計數(shù)10，000個淋巴細胞，得到相應(yīng)淋巴細胞百分數(shù)。以所測的淋巴細胞百分數(shù)為統(tǒng)計指標(biāo)，用STATA7.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計

5、處理。 結(jié)果:第一部分組織學(xué)實驗研究結(jié)果表明去細胞神經(jīng)與新鮮神經(jīng)相比較細胞和髓鞘被徹底清除，許旺細胞基底板層保留完好，成為空的神經(jīng)基質(zhì)管。免疫原性成分清除徹底。 第二部分免疫學(xué)實驗研究結(jié)果表明在術(shù)后各時間點中，化學(xué)去細胞神經(jīng)同種異體和異種神經(jīng)移植組CD3、CD4、CD8、CD25陽性T細胞率以及IL-2、IFN-γ、TNF-α陽性細胞率與假手術(shù)對照組、自體神經(jīng)移植組相比無統(tǒng)計學(xué)差異，而新鮮同種異體及異種神經(jīng)移植組在相應(yīng)時